Dieses Video zeigt, wie das Wachstum von humanen embryonalen Stammzellen (hES) in Feeder-Zell-freien Bedingungen und wie kontinuierlich Durchgang hESCs in Feeder-Zell-freien Bedingungen aufrecht zu erhalten. Bestätigung der hESC Pluripotenz gewachsen in Feeder-Zell-freien Bedingungen durch Immunfluoreszenz-Mikroskopie ist auch bewiesen.
Abstract
Dieses Video zeigt, wie menschliche embryonale Stammzellen (hES) am embryonalen Maus-Fibroblasten (MEF) Feeder-Zellen, wie die Passage hESCs von MEF Platten Feeder zellfreien Matrigel Platten zu wachsen.
Protocol
hESC Kultur tägliche Wartung hESC Kulturmedien müssen alle 24 Stunden gewechselt werden. Von der ES Medien Vorratsflasche bei 4 ° C gelagert, nehmen Sie die Menge der Lösung benötigt werden (~ 20ml pro 6-well-Platte), in einem 50ml Falcon-Röhrchen und warm bis 37 ° C in einem Wasserbad. Nachdem die Medien wird erwärmt, fügen bFGF Lagerung bei 4 ° C bis zu einer Endkonzentration von 10ng/ml. Legen Sie die bFGF Aktie wieder bei 4 ° C sofort nach Gebrauch! Entfernen Sie aus dem 6-Well-Platte…
Discussion
Dieses Video zeigt, wie die Passage hESCs von MEF Platten Feeder zellfreien Matrigel Platten. Beachten Sie, dass die Kolonie Dichte auf Matrigel höher als die Dichte der Kolonien, die von üblichen Aufteilung auf MEFs ist. Immunfluoreszenzfärbung und Mikroskopie oder Durchflusszytometrie für hESC Pluripotenz Marker, wie Oct-4 und SSEA-4, sind nötig, um Wartung von Zellkulturen in einem undifferenzierten Zustand in Feeder-freien Kulturbedingungen zu bestätigen.
Acknowledgements
Menschliche embryonale Stammzellen-Studien in der Teitell Labor werden von einem California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Saatgut gewähren RS1-00313 unterstützt. Wir danken Mitglieder der Broad Center of Regenerative Medicine and Stem Cell Research an der UCLA, vor allem Dr. Amander Clark, Dr. Jerome Zack, und die Mitglieder des UCLA Broad Institute Stem Cell Core Facility für ihre Unterstützung unserer Studien.
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