Dissection de SNC larvaire chez Drosophila melanogaster
Summary
Dans cet article, nous démontrons comment disséquer le système nerveux central du troisième stade drosophile larves.
Abstract
Le système nerveux central (SNC) des larves de drosophile est complexe et mal comprise. Une façon d'enquêter sur le système nerveux central est d'utiliser l'immunohistochimie pour examiner l'expression du roman de diverses protéines marqueurs. Coloration des larves ensemble est impraticable parce que la cuticule dure empêche les anticorps de pénétrer à l'intérieur de la cavité corporelle. Afin de colorer ces tissus, il est nécessaire de disséquer l'animal avant fixation et coloration. Dans cet article, nous démontrons comment disséquer larves de drosophile, sans endommager le système nerveux central. Commencez par déchirer la larve de moitié avec une paire de pinces fines, puis tournez la cuticule «inside-out" pour exposer le système nerveux central. Si la dissection est effectuée avec soin la SNC restera attaché à la cuticule. Nous conservons généralement le SNC attaché à la cuticule au long des étapes de fixation et de coloration, et seulement de supprimer complètement le SNC de la cuticule, juste avant le montage des échantillons sur des lames de verre. Nous montrons aussi quelques images représentatives d'une SNC larvaires colorés avec Eve, un facteur de transcription exprimé dans un sous-ensemble de neurones dans le SNC. L'article conclut par une discussion de quelques-unes des utilisations pratiques de cette technique et les difficultés qui pourraient surgir.
Protocol
Discussion
Cette vidéo montre comment disséquer le système nerveux central du troisième stade drosophile larves. Après dissection, le CNS peut être teint en utilisant un protocole d'immunohistochimie standard. Actuellement, il reste encore beaucoup à découvrir sur la façon dont le système nerveux adulte est généré ainsi que la façon dont il stocke et transmet des informations. Les études sur le développement des larves du SNC chez la drosophile devrait améliorer nos connaissances sur le câblage du système nerveux et la fonction….
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| forceps | fine tipped | |||
| 9-well watch glass | ||||
| plastic petri dish |
Referências
- Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13, 507-523 (1994).
- Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128. , 1899-1909 (2001).
