Dissecção do CNS Larval em Drosophila melanogaster
Summary
Neste artigo vamos demonstrar como dissecar o sistema nervoso central do terceiro instar as larvas Drosophila.
Abstract
O sistema nervoso central (SNC) de larvas de Drosophila é complexa e mal compreendida. Uma maneira de investigar o sistema nervoso central é a utilização de imuno-histoquímica para analisar a expressão do romance de várias proteínas e marcador. Coloração das larvas de todo é inviável porque a cutícula resistente impede anticorpos de penetrar no interior da cavidade do corpo. , A fim de mancha estes tecidos é necessário dissecar o animal antes de fixar e coloração. Neste artigo vamos demonstrar como dissecar as larvas Drosophila sem danificar o sistema nervoso central. Comece rasgando a larva ao meio com uma pinça fina, e depois vire a cutícula "dentro para fora" para expor o CNS. Se a dissecção é realizada com cuidado o SNC vai permanecer solidários com a cutícula. Costumamos manter o sistema nervoso central associadas à cutícula durante todas as etapas de fixação e coloração, e só remover completamente o sistema nervoso central da cutícula pouco antes da montagem das amostras em lâminas de vidro. Mostramos também algumas imagens de um representante do SNC larval corados com Eva, um fator de transcrição expresso em um subconjunto de neurônios no sistema nervoso central. O artigo conclui com uma discussão sobre alguns dos usos práticos da técnica e as dificuldades potenciais que possam surgir.
Protocol
Discussion
Este vídeo demonstra como dissecar o SNC de terceiro instar as larvas Drosophila. Após a dissecção, o SNC pode ser manchado usando um protocolo de imuno-histoquímica padrão. Atualmente, grande parte ainda é desconhecido sobre como o sistema nervoso adulto é gerado, bem como a forma como ele armazena e transmite informações. Estudos do desenvolvimento larval Drosophila CNS deverá reforçar o nosso conhecimento da fiação do sistema nervoso e função.
Larvas de Drosophila apresentam uma série de comportamentos stereotpye…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| forceps | fine tipped | |||
| 9-well watch glass | ||||
| plastic petri dish |
Referências
- Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13, 507-523 (1994).
- Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128. , 1899-1909 (2001).
