P0 신생아 쥐에서 Hippocampal 신경의 주요 문화
Summary
해부 및 개별 뇌 영역에서 세포의 성장은 세포와 생리적 매개 변수의 조사를 용이하게합니다. 우리는 혈청이없는 환경에서 신경 세포 – 풍부한 문화를 생산하는 주요 세포 culturing에 대한 방법을 설명합니다.
Abstract
hippocampal 신경의 생리적 특성은 일반적으로 특히 때문에 학습 및 메모리에 해마의 참여의 조사입니다. 기본 hippocampal 세포 culturing은 neuroscientists는 개별 세포와 단일 버렸네 수준에서 뉴런의 활동과 속성을 확인하실 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 신생아 쥐의 기본 hippocampal 세포를 분리하고 성장하는 방법을 보여줍니다. 해마는 2~3분만큼 짧은 각 신생아 동물로부터 격리 수 있으며, 문화 두 주에 유지하실 수 있습니다. 우리는 또한 간략하게 ratiometric 칼슘 이미징 이러한 hippocampal 뉴런을 사용하는 방법을 보여줍니다 것입니다. 이 프로토콜은 어떠한 수정을 거의, 해마에 대한 과정을 설명하는 동안, 그것은 두뇌의 다른 지역에 적용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 게리 뱅커와 김 고슬린 1의 혁신적인 작품의 수정으로 개발되었습니다. 이 책은 culturing 세포에 관심이 사람을위한 필수적인 리소스입니다 -뿐만 아니라 신경 세포 – 풍부한 문화는 현재 프로토콜 설명했다.
세포 culturing에있는 세 개의 가장 중요한 요소는 다음과 같습니다 불임, 속도, 사용되는 매체의 선택이다.
불임 – 층류 / 살균 후드, 무균 조건 및 무균 인큐베이…
Acknowledgements
JLN는 MH 68347에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Antibiotic antimitotic | Invitrogen | 15240062 | ||
| B-27 Supplement | Invitrogen | 17504044 | Serum free | |
| Boric Acid | Sigma | B6768 | ||
| Dnase I | Sigma | DN25 | ||
| Fura-2, AM cell permeant | Molecular Probes | F1221 | ||
| Glucose | Sigma | G7528 | ||
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | ||
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | ||
| MEM | Invitrogen | 51200038 | ||
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | Without phenol red | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma | P6282 | ||
| Pyruvic Acid | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Pyruvate | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Tetraborate | Sigma | |||
| Trypsin, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
