الثقافة الأولية من الخلايا العصبية قرن آمون من الفئران حديثي الولادة P0
Summary
تشريح ونمو الخلايا من منطقة في الدماغ الفردية يسهل التحقيق في المعلمات الخلوية والفسيولوجية. نحن تصف طريقة لزرع الخلايا الأولية التي تنتج الخلايا العصبية التخصيب الثقافات في بيئة خالية من المصل.
Abstract
عادة يتم التحقيق الخصائص الفيزيولوجية للعصبونات الحصين ، وخصوصا بسبب تورط حصين في التعلم والذاكرة. زراعة الخلايا الأولية الحصين يسمح علماء الأعصاب على دراسة النشاط وخصائص الخلايا العصبية في زنزانة فردية واحدة على مستوى المشبك. في هذا الفيديو ، سوف نقوم شرح كيفية عزل وزراعة الخلايا الأولية الحصين من الفئران حديثي الولادة. قد تكون معزولة الحصين من كل حيوان الأطفال حديثي الولادة في قصيرة بقدر 2 إلى 3 دقائق ، ويمكن المحافظة على الثقافات لمدة تصل الى أسبوعين. ونحن أيضا لفترة وجيزة تبين كيفية استخدام هذه الخلايا العصبية الحصين للتصوير ratiometric الكالسيوم. في حين أن هذا البروتوكول يصف عملية للقرن آمون ، مع قليل من دون تعديل ، ويمكن تطبيقه في مناطق أخرى من الدماغ.
Protocol
Discussion
وقد تم تطوير هذا البروتوكول بمثابة تعديل للعمل منوية من بانكر غاري وكيم Goslin 1. هذا الكتاب هو موردا أساسيا للراغبين في زراعة الخلايا — وليس فقط الثقافات عصبون التخصيب هو موضح في البروتوكول الحالي.
العوامل الثلاثة الأكثر أهمية في استنبات الخلايا هي…
Acknowledgements
وأيد JLN بواسطة MH 68347.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Antibiotic antimitotic | Invitrogen | 15240062 | ||
| B-27 Supplement | Invitrogen | 17504044 | Serum free | |
| Boric Acid | Sigma | B6768 | ||
| Dnase I | Sigma | DN25 | ||
| Fura-2, AM cell permeant | Molecular Probes | F1221 | ||
| Glucose | Sigma | G7528 | ||
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | ||
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | ||
| MEM | Invitrogen | 51200038 | ||
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | Without phenol red | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma | P6282 | ||
| Pyruvic Acid | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Pyruvate | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Tetraborate | Sigma | |||
| Trypsin, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
