Culture primaire de neurones de l'hippocampe de rats nouveau-nés P0

Summary

La dissection et la croissance de cellules provenant d'une zone du cerveau individuel facilite enquête sur les paramètres cellulaires et physiologiques. Nous décrivons un procédé de culture de cellules primaires qui produit des cultures enrichies en neurones dans un environnement dépourvu de sérum.

Abstract

Les propriétés physiologiques des neurones de l'hippocampe sont couramment étudiés, notamment en raison de l'implication de l'hippocampe dans l'apprentissage et la mémoire. Primaire culture cellulaire hippocampique permet neuroscientifiques d'examiner l'activité et les propriétés des neurones à la cellule individuelle et le niveau de la synapse unique. Dans cette vidéo, nous allons démontrer comment isoler et de cultiver des cellules primaires d'hippocampe de rats nouveau-nés. L'hippocampe peut être isolée de chaque animal nouveau-né dans le plus court de 2 à 3 minutes, et les cultures peuvent être maintenus pendant jusqu'à deux semaines. Nous allons aussi brièvement démontrer comment l'utilisation de ces neurones de l'hippocampe pour l'imagerie calcique ratiométrique. Alors que ce protocole décrit le processus de l'hippocampe, avec peu ou aucune modification, il peut être appliqué à d'autres régions du cerveau.

Protocol

Avant l'isolement hippocampique Avant le début de l'isolement de l'hippocampe, assurez-vous que tous les outils sont stériles. Vaporiser le bas de la hotte de la culture à l'éthanol 70%, et place les outils à l'intérieur du capot. Vous aurez besoin de 6 – et 10-cm boîtes de Pétri, stérile poly-L lamelles de verre enduit, pipettes et des conseils, des pipettes jetables, et une pipette électrique. A partir de ce moment, pensez à utiliser une technique stérile corre…

Discussion

Ce protocole a été développé comme une modification de l'œuvre séminale de Gary Banquier et Kim Goslin ^1. Ce livre est une ressource essentielle pour quiconque s'intéresse à la culture de cellules – non seulement les cultures de neurones enrichi décrites dans le protocole actuel.

Les trois facteurs les plus critiques dans la culture cellulaire sont: la stérilité, la vitesse, le choix du support utilisé.

Stérilité – un écoulement laminaire / hotte stérile, des conditions d&#…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046