Cultura primaria di neuroni dell'ippocampo da P0 ratti neonati

Summary

La dissezione e la crescita delle cellule da una zona del cervello individuale facilita l'investigazione dei parametri cellulari e fisiologici. Descriviamo un metodo per la coltura di cellule primarie che produce neurone arricchito di culture in un ambiente privo di siero.

Abstract

Le proprietà fisiologiche dei neuroni dell'ippocampo sono comunemente indagati, soprattutto per il coinvolgimento dell'ippocampo nell'apprendimento e nella memoria. Primaria coltura delle cellule dell'ippocampo neuroscienziati permette di esaminare le attività e le proprietà dei neuroni in singole cellule e del livello singola sinapsi. In questo video ci dimostra come isolare e coltivare cellule primarie di ippocampo di ratti neonati. L'ippocampo possono essere isolati gli uni dagli animali appena nati nel più breve 2-3 minuti, e le culture può essere mantenuta per un massimo di due settimane. Ci sarà anche brevemente illustrare come utilizzare questi neuroni dell'ippocampo per l'imaging di calcio raziometrico. Anche se questo protocollo descrive il processo per l'ippocampo, con poca o nessuna modifica, può essere applicato ad altre regioni del cervello.

Protocol

Prima dell'isolamento dell'ippocampo Prima di iniziare l'isolamento dell'ippocampo, assicurarsi che tutti gli strumenti sono sterili. Spray giù il cappuccio della cultura con il 70% di etanolo, e atto gli strumenti all'interno della cappa. Avrete bisogno di 6 – e 10 cm di piastre di Petri, sterile poli-L coprioggetto vetro rivestito, pipette e le punte, pipette monouso, e un pipettatore elettrica. Da questo punto in poi, ricordatevi di usare correttamente la tecnica sterile…

Discussion

Questo protocollo è stato sviluppato come una modifica del lavoro seminale di Gary Banker e Kim Goslin ^1. Questo libro è una risorsa essenziale per chiunque sia interessato a cellule di coltura – non solo il neurone arricchito di culture descritte nel protocollo corrente.

I tre fattori più critici nella coltura delle cellule sono: la sterilità, la velocità, la scelta del mezzo utilizzato.

Sterilità – un flusso laminare / cappa sterile, condizioni asettiche, e una sterile incubatore sono obbl…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046