التصوير T الذاكرة المستجيب الخلايا في الأذن بعد تحريض DTH بالتبني
Summary
نحن هنا يبرهن على وجود طريقة لحمل وتسجيل التقدم المحرز في رد فعل متأخر (DTH) نوع فرط في الأذن الفئران. اعقب ذلك عرض لإعداد الأنسجة الأذن الفئران لتصوير ثنائي الفوتون من المستجيب / الذاكرة استجابة الخلايا التائية.
Abstract
تأخر فرط نوع (DTH) هو رد الفعل المناعي الذي اللاعبين الرئيسيين هم CCR7 — المستجيب / اللمفاويات التائية الذاكرة. هنا ، علينا أن نظهر وسيلة لحفز التقدم وتسجيل ردود فعل من البيوت في الأذن الفئران. اعقب ذلك عرض لإعداد الأنسجة الأذن الفئران لتصوير اثنين من الفوتون CCR7 — المستجيب / الذاكرة استجابة الخلايا التائية.
هو أحد البيوت التي يسببها بالتبني من قبل حقن داخل الصفاق من GFP المسمى البويضات محددة CCR7 — المستجيب / الذاكرة خط الخلايا التائية (Beeton ، C J. التجارب متصور ، العدد 8). ثم يتم السماح للتوازن الخلايا في الفئران لمدة 48 ساعة قبل التحدي عن طريق حقن أذن واحدة مع المياه المالحة (مراقبة الأذن) ، والآخر مع مزيج من مترافق 01:01 البويضات والبويضات الى تكساس الأحمر (OVA – TR) للسماح التصور الخلايا مستضد تقديم المقيمين.
نحن تصف طريقة لإعداد الأنسجة مفيدة لتصوير حركية من خلايا داخل طبقة الجلد العميقة خلال استجابة مناعية ، بالاشتراك مع التصور من ألياف الكولاجين التي التوافقي الجيل الثاني. يتم قطع نسيج الأذن إلى 5 مم X المربعات 5 (أكبر قليلا هو أفضل) والتي شنت على غطاء بلاستيكي باستخدام قسائم Vetbond ™ ، والتي يتم تأمينها ثم استخدام الشحوم سيليكون في غرفة التصوير وsuperfused بواسطة الأكسجين فقاعات نسيج الثقافة في المتوسط 37 درجة مئوية .
Protocol
Referências
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
