Imagerie Les cellules T effectrices de mémoire dans l'oreille après induction de SRD adoptifs
Summary
Ici nous démontrons une méthode pour induire et d'enregistrer les progrès d'un retard de type hypersensibilité (SRD) réaction de l'oreille chez le rat. Elle est suivie par une démonstration de la préparation du tissu de l'oreille chez le rat pour l'imagerie à deux photons de la réponse cellulaire effecteur / T mémoire.
Abstract
Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction immunitaire dans laquelle les principaux acteurs sont CCR7 – effecteur / lymphocytes T mémoire. Ici, nous démontrons une méthode pour induire et d'enregistrer les progrès d'une réaction d'hypersensibilité retardée dans l'oreille de rat. Elle est suivie par une démonstration de la préparation du tissu de l'oreille chez le rat pour l'imagerie à deux photons de l'CCR7 – la réponse des cellules effectrices / T mémoire.
Un SRD adoptifs est induite par l'injection intrapéritonéale de GFP-étiquetée spécifiques de l'OVA CCR7 – ligne de cellules effectrices / T mémoire (Beeton, C J. expériences visualisées, numéro 8). Les cellules sont ensuite autorisés à s'équilibrer dans le rat pendant 48 heures avant l'épreuve par l'injection d'une oreille avec une solution saline (contrôle oreille) et l'autre avec un mélange 1:1 de conjugués d'ovules et d'ovules au Texas-Red (Ova-TR) pour permettre la visualisation des résidents cellules présentatrices d'antigène.
Nous décrivons une méthode de préparation des tissus utiles pour l'imagerie de la motilité des cellules dans la couche profonde cutanée durant une réponse immunitaire, en conjonction avec la visualisation des fibres de collagène par la génération de second harmonique. Tissu de l'oreille est coupé en carrés de 5 mm x 5 (légèrement plus grand, c'est mieux) et monté sur des lamelles en plastique à l'aide Vetbond ™, qui sont ensuite fixés avec de la graisse de silicone dans une chambre d'imagerie et perfusées par l'oxygène-bulles moyennes de culture de tissus à 37 ° C .
Protocol
Referências
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
