Aqui demonstramos um método para induzir e gravar o progresso de um atraso de hipersensibilidade do tipo-reação (DTH) na orelha de ratos. Isso é seguido por uma demonstração da preparação do tecido da orelha de rato para geração de imagens de dois fótons da resposta das células de memória / T efectoras.
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Artigo de método
As células de memória efetoras T imagem no ouvido após a indução de DTH Adoptive
Neste artigo
Resumo
Resumo
De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação imunológica em que os jogadores principais são CCR7 - efetoras / linfócitos T de memória. Aqui, nós demonstramos um método para induzir e gravar o progresso de uma reação de DTH no ouvido do rato. Isso é seguido por uma demonstração da preparação do tecido da orelha de rato para geração de imagens de dois fótons do CCR7 - resposta das células de memória / efetoras T.
Um DTH adotiva é induzida pela injeção intraperitoneal de GFP-rotulados Ova específicos CCR7 - linha de célula de memória / efetoras T (Beeton, C J. Experiências visualizado, Issue 8). Células são então permaneceram em ratos por 48 horas antes do desafio, injetando uma orelha com uma solução salina (controle de ouvido) ea outra com uma mistura 1:1 de conjugados óvulos e Ova de Texas-Vermelha (Ova-TR) para permitir a visualização residente de células apresentadoras de antígenos.
Nós descrevemos um método de preparação dos tecidos útil para geração de imagens a motilidade das células na camada profunda da derme durante uma resposta imune, em conjunto com a visualização das fibras colágenas por geração de segundo harmônico. Tecido da orelha é cortada em 5 x 5 quadrados mm (um pouco maior é melhor) e montados em lamínulas de plástico usando Vetbond ™, que são protegidos usando graxa de silicone em uma câmara de imagem e superfused por oxigênio bolhas meio de cultura de tecidos a 37 ° C .
Protocolo
Indução de DTH Adoptive
Por favor, veja o artigo jove: Indução e Monitorização de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos
Christine Beeton, George K. Chandy
Departamento de Fisiologia e Biofísica da Universidade da Califórnia, Irvine
Experimentos J. visualizado, Edição 8
Aqui, temos modificado esse protocolo usando antígeno (ovalbumina) conjugado com Texas Red-na proporção de 1:1 com antígeno não marcado para permitir a visualização de fagocíticas células apresentadoras de antígenos.
Colheita de tecido da ....
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Referências
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B.
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Reimpressões e permissões
