Imágenes de las células efectoras T de memoria en el oído después de la inducción de DTH adoptivos
Summary
Aquí se demuestra un método para inducir y registrar el progreso de un retraso de tipo de hipersensibilidad (DTH) la reacción en el oído de la rata. Esto es seguido por una demostración de la elaboración de tejidos de ratas oído para la imagen de dos fotones de la respuesta del efector / memoria de células T.
Abstract
Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inmune en el cual los principales actores son CCR7 – efectoras / memoria los linfocitos T. En este caso, se demuestra un método para inducir y registrar el progreso de una reacción de DTH en el oído de la rata. Esto es seguido por una demostración de la elaboración de tejidos de ratas oído para la imagen de dos fotones de la CCR7 – respuesta efectoras / memoria de células T.
Un DTH adoptivos es inducida por la inyección intraperitoneal de las buenas prácticas agrarias con etiqueta específica OVA-CCR7 – línea efectoras / memoria de células T (Beeton, J. C experimentos visualizados, número 8). Células se dejaron equilibrar en la rata durante 48 horas antes de la exposición mediante la inyección de una oreja con una solución salina (control del oído) y el otro con una mezcla de 1:1 de conjugado OVA y OVA de Texas-Red (Ova-TR) para permitir la visualización residente de células presentadoras de antígeno.
Se describe un método de preparación de tejidos útiles para obtener imágenes de la motilidad de las células en la capa de la dermis profunda durante una respuesta inmune, en combinación con la visualización de las fibras de colágeno por la generación del segundo armónico. Tejido del oído se corta en cuadrados de 5 mm x 5 (ligeramente más grande es mejor) y montado sobre cubreobjetos de plástico con Vetbond ™, que luego se fija con grasa de silicona en una cámara de imágenes y superfused por burbujas de oxígeno medio de cultivo de tejidos a 37 ° C .
Protocol
Referências
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
