Imaging Effektenheter Minne T-celler i örat efter induktion av Adoptivföräldrar DTH
Summary
Här visar vi en metod för att framkalla och inspelning utvecklingen av en fördröjd typ överkänslighet (DTH) reaktion hos råtta örat. Detta följs av en demonstration av utarbetandet av råtta örat vävnad för två-photon avbildning av effektor / minne T-cell svar.
Abstract
Fördröjd överkänslighet (DTH) är en immunreaktion där de viktigaste spelarna är CCR7 – effektor / minne T-lymfocyter. Här visar vi en metod för att framkalla och inspelning utvecklingen av en DTH reaktion hos råtta örat. Detta följs av en demonstration av utarbetandet av råtta örat vävnad för två-photon avbildning av CCR7 – effektor / minnes-T-cells svar.
En adoptivfamilj DTH induceras av intraperitoneal injektion av GFP-märkta ägg-specifika CCR7 – effektor / minne T-cell linje (Beeton, C J. visualiseras Experiment, Utgåva 8). Cellerna är då tillåtet att balansera på råtta i 48 timmar innan utmaningen genom att injicera ett öra med koksaltlösning (kontroll örat) och den andra med en 01:01 blandning av ägg och ägg konjugerat med Texas-Röd (OVA-TR) för att visualisera av inhemska antigen-presenterande celler.
Vi beskriver en metod av vävnad förberedelse användbar för avbildning motilitet celler i djup dermal skiktet under ett immunsvar, i samband med visualisering av kollagen fibrer för sekund harmonic generation. Öron vävnad skärs i 5 x 5 mm rutor (något större är bättre) och monteras på plast täckglas med Vetbond ™, som sedan säkras med silikonfett i en avbildning kammare och superfused av syre bubblas-vävnad odlingsmedium vid 37 ° C .
Protocol
Referências
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
