Aquí se demuestra un método para inducir y registrar el progreso de un retraso de tipo de hipersensibilidad (DTH) la reacción en el oído de la rata. Esto es seguido por una demostración de la elaboración de tejidos de ratas oído para la imagen de dos fotones de la respuesta del efector / memoria de células T.
Abstract
Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inmune en el cual los principales actores son CCR7 – efectoras / memoria los linfocitos T. En este caso, se demuestra un método para inducir y registrar el progreso de una reacción de DTH en el oído de la rata. Esto es seguido por una demostración de la elaboración de tejidos de ratas oído para la imagen de dos fotones de la CCR7 – respuesta efectoras / memoria de células T.
Un DTH adoptivos es inducida por la inyección intraperitoneal de las buenas prácticas agrarias con etiqueta específica OVA-CCR7 – línea efectoras / memoria de células T (Beeton, J. C experimentos visualizados, número 8). Células se dejaron equilibrar en la rata durante 48 horas antes de la exposición mediante la inyección de una oreja con una solución salina (control del oído) y el otro con una mezcla de 1:1 de conjugado OVA y OVA de Texas-Red (Ova-TR) para permitir la visualización residente de células presentadoras de antígeno.
Se describe un método de preparación de tejidos útiles para obtener imágenes de la motilidad de las células en la capa de la dermis profunda durante una respuesta inmune, en combinación con la visualización de las fibras de colágeno por la generación del segundo armónico. Tejido del oído se corta en cuadrados de 5 mm x 5 (ligeramente más grande es mejor) y montado sobre cubreobjetos de plástico con Vetbond ™, que luego se fija con grasa de silicona en una cámara de imágenes y superfused por burbujas de oxígeno medio de cultivo de tejidos a 37 ° C .
Protocol
La inducción de DTH adoptivos Por favor, consulte el artículo Jove: Inducción y Seguimiento de la Adopción de hipersensibilidad retardada en ratas Christine Beeton, George K. Chandy Departamento de Fisiología y Biofísica de la Universidad de California, Irvine J. visualizados experimentos, Número 8 Aquí, hemos modificado este protocolo mediante el antígeno (ovoalbúmina) conjugad…
Matheu, M. P., Beeton, C., Parker, I., Chandy, K. G., D. Cahalan, M. Imaging Effector Memory T cells in the Ear After Induction of Adoptive DTH. J. Vis. Exp. (18), e907, doi:10.3791/907 (2008).