Un test pour mesurer la réactivité comportementale du poisson-zèbre à l'évolution des intensités de lumière
Summary
Nous avons développé la réponse visuelle et de motricité pour quantifier la puissance du moteur du poisson zèbre larvaire dans la réponse aux augmentations de lumière et décrémente. Nous avons également examiné la vision mutants poisson zèbre, y compris le pas de la réponse optocinétique (CNRC) mutants, qui étaient censées être complètement aveugle lorsqu'il est testé par un autre test de vision, le réflexe optocinétique.
Abstract
Le réflexe de optocinétique (OKR) est une base visuelle réflexe exposées par la plupart des vertébrés et joue un rôle important dans la stabilisation de l'oeil par rapport à la scène visuelle. Toutefois, l'OKR exige que l'animal détectez des bandes en mouvement et il est possible que les poissons qui ne parviennent pas à exposer une OKR peut ne pas être complètement aveugle. Un poisson zèbre mutant, l'absence de réponse optocinétique c (CNRC) n'a pas OKR dans n'importe quelles conditions de lumière testé et a été signalé à être complètement aveugle. Auparavant, nous avons montré que l'activité des cellules ganglionnaires OFF peuvent être enregistrées dans ces mutants. Afin de déterminer si le poisson mutant sans OKR tels que le mutant CNRC peut détecter par incréments de lumière simple et décrémente nous avons développé le test de motricité visuelle comportementale (VMR). Dans cet essai, les larves de poisson zèbre simples sont placés dans chaque puits d'une plaque de 96 puits permettant la surveillance simultanée des larves en utilisant un système automatisé de vidéo-système de suivi. Les réponses locomotrices de chaque larve à 30 minutes de lumière ON et OFF 30 minutes de lumière ont été enregistrées et quantifiées. WT poissons ont un bref pic d'activité automobile sur les lumières allumées, connue comme la réaction de sursaut, suivi d'un retour plus faibles que l'activité de base, appelé à un gel. Poissons WT également fortement augmenter leur activité locomotrice immédiatement après lumières et que progressivement (plus de quelques minutes) retour à l'activité locomotrice de base. Les mutants du CNRC réagissent de façon similaire à la lumière OFF comme le poisson WT, mais présentent une légère diminution de leur activité en moyenne par rapport aux poissons WT. L'activité motrice en réponse à la lumière ON dans nrc mutants est retardée et léthargique. Il ya un temps de montée lente de la réponse du CNRC mutant à la lumière SUR par rapport à la lumière en poids sur la réponse. Les résultats indiquent que les poissons du CNRC ne sont pas complètement aveugles. Parce que les téléostéens peuvent détecter la lumière à travers la rétine non tissus, nous a confirmé que les réponses immédiates à la lumière du comportement d'intensité changements nécessitent yeux intacts en utilisant le chokh (chk) des mutants, qui manquent totalement les yeux dès les premiers stades de développement. Dans notre test VMR, les mutants ne présentent aucun chk réaction de sursaut soit la lumière ON ou OFF, montrant que les yeux latéraux de médiateur dans ce comportement. Le dosage de VMR décrit ici un complément du dosage OKR bien établie, qui n'a pas de tester la capacité des larves de poisson zèbre pour répondre aux changements dans les intensités lumineuses. De plus, l'automatisation du test VMR se prête à criblage à haut débit pour les défauts de l'intensité lumineuse conduit réponses visuelles.
Protocol
Discussion
Les procédures expérimentales, nous montrons dans le film sont tous représentatifs de poissons WT. Cependant, ces expériences peuvent être réalisées de façon analogue sur le poisson mutant ainsi (voir la section résultat représentatif). Nous suggérons aux poissons WT plaque et le poisson mutant sur la même plaque dans un aperçu damier à des fins de contrôle optimal.
Lors de l'utilisation du poisson mutant sur la même plaque que les poissons WT vous assurer que vous écrivez ce type de poisson a été plaqué dans…
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par l'Institut national de subventions et de santé EY0081 5T32UY07145 et par la Fondation Chevaliers Templiers Eye. Jason Rihel est un Fellow de Bristol-Squibb de la Fondation Life Sciences Research.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Microplate devices | Tool | Whatman | 7701-1651 | |
| Transfer pipetes | Tool | VWR | 202205 | |
| Fish water | Reagent | refer to reference #4 | ||
| Recording chambers (Zebrabox) | Tool | Viewpoint Lifesciences | ||
| Videotrack Software | Tool | Viewpoint Lifesciences |
Referências
- Allwardt, A. B., Lall, B. A., Brockerhoff, S. E. Synapse formation is arrested in retinal photoreceptors of the zebrafish nrc mutant. J Neurosci. 21, 2330-2330 (2001).
- Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R. OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 19126-19126 (2007).
- Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A. Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish. J Neurosci. 26, 13400-13400 (2006).
- Westerfield, M. . The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish. , (2000).
