라이트 농도의 변화에 Zebrafish의 응답을 측정하기 위하여 행동 어세이
Summary
우리는 빛의 단위 및 감소에 대응하기 애벌레 zebrafish의 모터 출력을 quantitate하는 비주얼 모터 응답을 개발했습니다. 우리는 또 다른 비전 분석, optokinetic 반사에 의해 시험을 할 때 상당히 운이 좋았다고 생각했던 optokinetic 응답 (NRC) 돌연변이, 아무도를 포함하여 zebrafish 비전 돌연변을 조사.
Abstract
optokinetic 반사 (OKR)는 기본적인 시각 반사 대부분의 척추 동물에 의해 전시 및 영상 장면에 상대적으로 눈에 안정화에 중요한 역할을합니다. 그러나, OKR는 동물 이동 줄무늬를 감지해야하며 그것은 OKR을 전시하지 않는 물고기가 완전히 장님이되지 않을 수도 있습니다. 하나의 돌연변이 zebrafish, 노 optokinetic 응답 C (NRC)는 어떤 조명 조건 테스트 상당히 운이 좋았다고보고했습니다 아래에는 OKR이 없습니다. 이전, 우리는 OFF – 신경절 세포 활동이 돌연변이에 기록될 수 것으로 나타났습니다. 같은 NRC 돌연변이로 노 OKR와 돌연변이 물고기가 간단한 조명 증가 그리고 우리가 시각 모터 행동 분석 (VMR)를 개발 감소를 검색할 수 있는지 여부를 확인합니다. 이 분석에서는 단일 zebrafish의 애벌레는 자동으로 비디오 추적 시스템을 사용하여 유충의 동시 모니터링을 허용하는 96 – 웰 플레이트의 각 우물에 배치됩니다. 빛 30 분 30 분 가벼운 OFF 각 유충의 전위의 반응은 기록하고 계량했다. WT 생선은 낮은보다 기본 활동을 반환 다음 놀라게 반응으로 알려진 불을,시 모터 활동의 간단한 증가를 동결했다. WT의 물고기 (몇 분 이상) 기준 전위의 활동에 수익을 또한 급격하게 조명을 OFF 다음 즉시 전위의 활동을 증가만을 점차. NRC의 돌연변이 WT 물고기 OFF 가벼운 비슷하게 반응하지만, WT 물고기에 비해 자신의 평균 활동에 약간의 감소를 나타냅니다. NRC 돌연변에서 빛에 대한 응답으로 모터 활동이 지연하고 둔한입니다. 로 반응 WT 조명에 비해 수월하기 위해 NRC 돌연변이의 응답 속도가 느린 상승 시간이 있습니다. 결과는 NRC 물고기 완전히 맹인 아니라는 것을 나타냅니다. teleosts가 아닌 망막 조직을 통해 빛을 감지할 수 있기 때문에, 우리는 가벼운 강도의 변화에 즉각적인 행동 반응이 완전히 개발의 초기 단계에서 눈을 부족 chokh (체크해봐) 돌연변를 사용하여 그대로 눈을 필요는 것을 확인. 우리 VMR의 분석에서 확인해의 돌연변이 측면 눈이 문제를 중재 것을 보여주는 하나 ON 빛 또는 OFF로 더 놀라게 응답을 전시하지 않습니다. VMR의 분석 여기 빛의 농도의 변화에 대응하는 zebrafish 애벌레의 능력을 테스트하지 않습니다 잘 설립 OKR 분석을 보완 설명했다. 또한 VMR 분석의 자동화 시각적 반응을 중심 가벼운 강도의 결함에 대한 높은 처리량 검사라는 것으로.
Protocol
Discussion
우리가 영화에서 보여주 실험 절차 WT 생선의 대표입니다. 그러나 이러한 실험은 돌연변이 물고기뿐만 아니라 (대표 결과 섹션을 참조) analogously 할 수 있습니다. 우리는 최적의 제어 목적 검사기 보드 개요에서 같은 접시 플레이트 WT 생선과 돌연변이 물고기로하는 것이 좋습니다.
WT 물고기 같은 접시에 돌연변이 물고기를 사용할 때 당신은 물고기의 종류가 각 우물에 도금 있었는지 적어 있는지 확인하십?…
Acknowledgements
이 작품은 건강 보조금 EY0081 및 5T32UY07145 국립 연구소와 기사단 아이 재단에 의해 지원되었다. 제이슨 Rihel는 생명 과학 연구 재단의 브리스톨 – Squibb의 연구원입니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Microplate devices | Tool | Whatman | 7701-1651 | |
| Transfer pipetes | Tool | VWR | 202205 | |
| Fish water | Reagent | refer to reference #4 | ||
| Recording chambers (Zebrabox) | Tool | Viewpoint Lifesciences | ||
| Videotrack Software | Tool | Viewpoint Lifesciences |
Referências
- Allwardt, A. B., Lall, B. A., Brockerhoff, S. E. Synapse formation is arrested in retinal photoreceptors of the zebrafish nrc mutant. J Neurosci. 21, 2330-2330 (2001).
- Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R. OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 19126-19126 (2007).
- Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A. Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish. J Neurosci. 26, 13400-13400 (2006).
- Westerfield, M. . The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish. , (2000).
