Xenopus oocytes में व्यक्त आयन चैनल के पैच दबाना रिकॉर्डिंग
Summary
यह एक परिचय Xenopus laevis oocytes से दबाना रिकॉर्डिंग पैच के रूप में इरादा है. यह vitelline झिल्ली हटाने, gigaohm मुहर (gigaseal) के गठन और बाहर – बाहर टोपोलॉजी करने के लिए पैच के वैकल्पिक रूपांतरण शामिल हैं.
Abstract
Sakmann और 1 Neher, 2 द्वारा अपने विकास के बाद से, पैच दबाना एकल या एकाधिक कक्षों में आयन चैनलों के electrophysiological माप के लिए एक अत्यंत उपयोगी तकनीक के रूप में स्थापित हो गया है. दोनों उनके पैतृक वातावरण में आयन चैनलों के लिए इस तकनीक को लागू किया जा सकता है और जैसे अफ्रीकी clawed मेंढक, Xenopus laevis से काटा oocytes heterologous कोशिकाओं में व्यक्त की. यहाँ, हम पैच Xenopus oocytes से दबाना रिकॉर्डिंग की अच्छी तरह से स्थापित तकनीक का वर्णन. इस तकनीक को व्यक्त आयन चैनल के गुणों (macropatch) आबादी या व्यक्तिगत (एकल चैनल रिकॉर्डिंग) में या तो उपाय करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हम तकनीक पर ध्यान केंद्रित करने के लिए oocyte की तैयारी और मुहर पीढ़ी की गुणवत्ता को अधिकतम. सभी कारकों के साथ अनुकूलित किया है, इस तकनीक का 90 प्रतिशत से अधिक सफल मुहर पीढ़ी के एक प्रायिकता देता है. प्रक्रिया हर कारकों वह या वह सबसे महत्वपूर्ण पाता के आधार पर शोधकर्ता द्वारा अलग अनुकूलित कर सकते हैं, और हम दृष्टिकोण है कि हमारे हाथ में सबसे बड़ी सफलता के लिए नेतृत्व है मौजूद है.
Protocol
Discussion
Electrophysiological रिकॉर्डिंग के कई मापदंडों चर्चा यहाँ नहीं हैं. रिग स्थापना, प्रणाली शोर प्रबंधन, चैनल अभिव्यक्ति, और रिकॉर्डिंग प्रोटोकॉल भी अच्छा प्रयोगात्मक परिणाम के लिए महत्वपूर्ण हैं.
हमारे अनुभव में, इन विश?…
Acknowledgements
सिकुड़ समाधान नुस्खा आरडब्ल्यू Aldrich की प्रयोगशाला से है. स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान, राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन, अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन, पेशी Dystrophy एसोसिएशन, डोनाल्ड बी और डेलिया ई. बैक्सटर फाउंडेशन, Klingenstein फंड और तंत्रिका विज्ञान के लिए McKnight बंदोबस्ती: हम निम्नलिखित वित्तपोषी एजेंसियों और नींव समर्थन के लिए धन्यवाद.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Patch Clamp Amplifier & Software | Instrument | HEKA or Axon | EPC-10 | Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B) |
| No. 5 forceps (two pairs) | Tool | Fine Science Tools | ||
| Oocyte shrinking solution | Reagent | Ingredient In mM N-methyl-D-glucamine 220 HEPES 10 MgCl2 1 EGTA 10 Aspartic Acid 220 KCl 2 pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine | ||
| woven mesh | 800 um | Spectrum Laboratories INC | 146481 |
Referências
- Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260, 799-802 (1976).
- Sackmann, B., Neher, E. . Single-channel Recording. , (1983).
