Göra Patch-pipetter och Sharp Elektroder med en programmerbar Puller

Summary

Denna video visar hur man använder en programmerbar avdragare för att göra patch pipetter och skarpa elektroder för elektrofysiologi. Samma förfarande kan användas för att göra en mängd olika glas verktyg, inklusive injektionsnålar.

Abstract

Glas microelectrodes (även kallad pipetter) har en arbetshäst elektrofysiologi i årtionden. Idag är en sådan pipetter av glas kapillärerna med hjälp av en programmerbar avdragare. Sådana instrument värma kapillär med hjälp av antingen en metall glödlampor eller en laser och dra ut glaset med allvar, en motor eller både och. Pipetter för patch-clamp inspelning bildas med enbart värme och allvar, medan vassa elektroder för intracellulär inspelning använder en kombination av värme, allvar och en motor. Förfarandet används för att göra intracellulära inspelning pipetter liknar den som används för att göra injektionsnålar för en mängd olika tillämpningar, inklusive Crna injektion i Xenopus oocyter. I allmänhet kapillär glas <1,2 mm i diameter används för att göra pipetter för patch clamp inspelning, medan smalare glas används för intracellulär inspelning (ytterdiameter = 1,0 mm). För varje verktyg är avdragare programmerat något annorlunda. Denna video visar hur man kan göra båda typer av inspelning pipetter med hjälp av på förhand fastställda avdragare program.

Protocol

Dra pipetter Med hjälp av en mikroelektrod avdragare som Sutter P-97 Flaming / Brown, dra en uppsättning av ca 10-20 pipetter. Välj din kapillär glas. Vi använder borosilikat kapillärer (Sutter BF150-110-10, 1,5 mm ytterdiameter, 1,1 mm innerdiameter, 10cm lång). Förvara glaset försiktigt så att det förblir rent och dammfritt. Designa en dra-program. Vi använder en 5 stegs program, med fallande värme och hastighet för varje steg, och en liten dra på det sis…

Discussion

Protokollet bilden är här i dagligt bruk i elektrofysiologi laboratorier och används också för att göra injektionsnålar för celler och djur. Med en programmerbar avdragare är det lätt att göra pipetter för olika användningsområden. Med uppmärksamhet och omsorg, kommer glödtråden på din avdragare pågå i ett år eller längre. Lycka till med dina experiment.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micropipette Puller	Instrument	Sutter Instruments	P-97	Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries	Reagent	Sutter Instruments	BF150-86-10	Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.