形成免疫突触和Kinapse研究的支持平面双层膜

Summary

支持的平面双层功能强大的工具，可以用来模拟在免疫突触的分子间的相互作用。在这里，我们显示锚定细胞粘附蛋白来调节突触的形成脂质bilyer上单张和可视化突触的形成，使用TIRF显微镜的方法。

Abstract

支持的平面双层功能强大的工具，可以用来模拟在免疫突触的分子间的相互作用。为了模仿淋巴细胞和抗原提呈细胞之间的相互作用，我们用Ni2 +的螯合血脂重组细胞粘附和MHC蛋白质锚定与聚组氨酸标签双层上层单张。准备血脂，治疗会形成的双层玻璃表面，然后形成了一个专门的包含流量将增加淋巴细胞的细胞室的双层平面双层生成。然后，双层与倪和他的标签的重组蛋白被控加入。最后，淋巴细胞注射到流通池和TIRF显微镜可用于图像的突触的形成和机制，控制T细胞的运动，受体分拣网站，和受体的退化网站。

Protocol

1。准备脂类为了连结蛋白双层上层单张，我们使用的是镍 2 +螯合血脂，锚聚组氨酸标签的重组蛋白。某些类型的细胞可能会坚持非特异性Ni 2 +的涂层双层，但T细胞通常不这样做，使这种方法为研究T细胞活化的最佳。 脂质双分子层的解决方案是由准备解决20％的镍2 +螯合脂质和磷脂1-2毫升氯仿-甲醇在玻璃管的适当数额的80 ％。 溶剂蒸发温暖（30-37 ° C…