Ondersteunde Planar dubbellagen voor de vorming van studie van immunologische synapsen en Kinapse
Summary
Ondersteund vlakke bilagen zijn krachtige instrumenten die kunnen worden gebruikt om de moleculaire interacties in een immunologische synaps model. Hier tonen we methoden voor het verankeren van celadhesie eiwitten waarvan bekend is dat moduleren synapsvorming naar de bovenste folder van de lipide bilyer en synapsvorming met behulp van TIRF microscopie visualiseren.
Abstract
Ondersteund vlakke bilagen zijn krachtige instrumenten die kunnen worden gebruikt om de moleculaire interacties in een immunologische synaps model. Na te bootsen van de interacties tussen de lymfocyten en antigeen presenterende cellen, maken we gebruik Ni2 +-chelerende lipiden om recombinant celadhesie en MHC-eiwitten anker naar de bovenste folder van een bilaag met poly-histidine tags. Planar bilagen worden gegenereerd door het voorbereiden lipide, het behandelen van de glazen oppervlakken waar de bilaag zal vormen, en vervolgens de vorming van de dubbellaag in een gespecialiseerde kamer met een flow-cel waar de lymfocyten worden toegevoegd. Vervolgens bilagen zijn belast met Ni en zijn-tag recombinante eiwitten worden toegevoegd. Tot slot, lymfocyten worden geïnjecteerd in de flow cel en TIRF microscopie kan worden gebruikt om foto synapsvorming en de mechanismen die de controle T-cel motoriek, sites van de receptor sorteren, en de sites van receptor degradatie.
