Supportato bilayers Planar per la formazione degli Studi di sinapsi immunologica e Kinapse

Summary

Supportati doppi strati planari sono strumenti potenti che possono essere utilizzati per modellare le interazioni molecolari in una sinapsi immunologica. Qui vi mostriamo i metodi per l'ancoraggio delle proteine ​​di adesione cellulare conosciuto per modulare la formazione di sinapsi il foglio superiore della bilyer lipidi e visualizzare formazione di sinapsi usando la microscopia TIRF.

Abstract

Supportati doppi strati planari sono strumenti potenti che possono essere utilizzati per modellare le interazioni molecolari in una sinapsi immunologica. Per simulare le interazioni tra i linfociti e le cellule presentanti l'antigene, si usa Ni2 +-chelante lipidi per ancorare l'adesione delle cellule e proteine ​​ricombinanti MHC il foglio superiore di un doppio strato di poli-istidina tag. Doppi strati planari sono generate da preparazione dei lipidi, trattando le superfici di vetro, dove si forma il doppio strato, e poi formando il doppio strato in una sezione specializzata che contiene un flusso di celle dove i linfociti saranno aggiunti. Poi, doppi strati sono accusati di Ni e il suo-tagged proteine ​​ricombinanti sono aggiunti. Infine, i linfociti vengono iniettati nella cellula di flusso e microscopia TIRF possono essere utilizzati per la formazione di sinapsi immagine ed i meccanismi che controllano la locomozione delle cellule T, siti di smistamento dei recettori, e siti di degradazione del recettore.

Protocol

1. Preparare i lipidi Al fine di collegare le proteine ​​il foglio superiore di un doppio strato, usiamo Ni 2 + lipidi chelanti, che ancorano proteine ​​ricombinanti con poli-istidina tag. Alcuni tipi di cellule possono aderire in modo non specifico per Ni 2 + rivestite doppi strati, ma le cellule T generalmente non, rendendo questo metodo ottimale per studiare l'attivazione delle cellule T. La soluzione doppio strato lipidico è costituito da preparando una soluzion…