Voorbereiding en onderhoud van achterwortelganglia Neuronen in Gecompartimenteerde culturen
Summary
Hier beschrijven we de techniek van het opstellen en onderhouden van gecompartimenteerd kamers voor het kweken van sensorische neuronen van de achterwortelganglia.
Abstract
Neuronen verlengen axonale processen die ver verwijderd zijn van het cellichaam te richten weefsels, waar de target-derived growth factoren die nodig zijn voor neuronale overleving en functie innerveren. Neurotrofinen zijn specifiek nodig zijn om de overleving en differentiatie van sensorische neuronen innerveren handhaven, maar de vraag hoe deze doelgroep afgeleide neurotrofinen mee aan het cellichaam van de neuronen innerveren is een fase van actief onderzoek meer dan 30 jaar. De meest geaccepteerde model van hoe neurotrofine signalen bereiken het cellichaam stelt voor dat de signalering endosomen retrogradely voeren dit signaal langs de axon. Om de retrograde transport studie werd een cultuur dat oorspronkelijk ontwikkeld door Robert Campenot, in welke cel lichamen zijn geïsoleerd van hun axonen. De techniek van het voorbereiden van deze gecompartimenteerd kamers voor het kweken van sensorische neuronen recapituleert de selectieve stimulatie van de zenuwuiteinden die zich voordoet in vivo volgende release van target-afgeleide neurotrofinen. Retrograde signalering gebeurtenissen die lange afstand microtubule afhankelijk retrograad transport nodig hebben belangrijke implicaties voor de behandeling van neurodegeneratieve aandoeningen.
Protocol
Discussion
In deze video, hebben we aangetoond hoe voor te bereiden en gecompartimenteerd kamers te behouden voor het gebruik in het kweken van DRG neuronen. Goed uitgevoerd, dit systeem kan de scheiding van de cel lichaam van de axon om de mechanismen die neurotrofinen signaal over lange axonen te bestuderen. Omdat er vloeibare isolatie tussen de compartimenten, het zorgt voor selectieve stimulatie of behandeling van een compartiment zonder dat de andere compartimenten wordt aangetast. Gecompartimenteerd kamer culturen kunnen ondersteunen andere soor…
Acknowledgements
We willen graag Katharina Cosker en Stephanie Courchesne bedanken voor nuttige discussies.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Outro | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
Referências
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
