A técnica de coleta de líquido cefalorraquidiano Serial da Cisterna Magna em rato

Resumo

Modelos transgênicos (Tg) do mouse do AD uma excelente oportunidade para investigar como e por que níveis Aâ ou tau na mudança CSF como a doença progride em pacientes humanos. Aqui, nós demonstramos uma refinada técnica de punção da cisterna magna para amostragem CSF serial do mouse.

Resumo

Doença de Alzheimer (AD) é uma doença neurodegenerativa progressiva que é patologicamente caracterizada pela deposição extracelular de β-amilóide peptídeo (Aâ) e acúmulo de proteína tau intraneuronais hiperfosforilada. Porque líquido cefalorraquidiano (LCR) está em contato direto com o espaço extracelular do cérebro, que proporciona um reflexo das mudanças bioquímicas no cérebro em resposta a processos patológicos. CSF de pacientes com DA mostra uma diminuição na forma de 42 aminoácidos de Aâ (Aβ42), e aumenta em tau tau total e hiperfosforilada, embora os mecanismos responsáveis ​​por essas alterações ainda não são totalmente compreendidos. Modelos transgênicos (Tg) do mouse do AD uma excelente oportunidade para investigar como e por que níveis Aâ ou tau na mudança CSF como a doença progride. Aqui, nós demonstramos uma refinada técnica de punção da cisterna magna para a CSF de amostragem a partir do mouse. Esta técnica de amostragem extremamente suave permite que as amostras de série CSF a serem obtidos com o mouse mesmo em intervalos de 2-3 meses, que minimiza bastante o efeito de confusão entre mouse-variabilidade nos níveis Aâ ou tau, tornando possível detectar alterações sutis ao longo do tempo. Em combinação com Aâ ELISA e tau, esta técnica será útil para estudos destinados a investigar a relação entre os níveis de CSF Aβ42 e tau, e seu metabolismo no cérebro em modelos de ratos AD. Estudos em camundongos Tg poderia fornecer validação importante quanto ao potencial da CSF Aâ ou níveis de tau para serem utilizados como marcadores biológicos para a progressão da doença, monitorização e para monitorar o efeito de intervenções terapêuticas. Como os ratos podem ser sacrificados e os cérebros podem ser examinados por alterações bioquímicas ou histológicas, os mecanismos subjacentes à alterações do LCR pode ser melhor avaliada. Estes dados são susceptíveis de ser informativo para a interpretação de alterações do LCR humano AD.

Protocolo

Puxando o tubo de vidro capilar

1. O tubo de vidro capilar é comprado de Instrumento Sutter Inc (vidro borosilicato, B100-75-10).
2. Puxe a tubos capilares em um Sutter P-87 Flaming micropipeta extrator, com o índice de calor fixado em 300 eo índice de pressão fixado em 330.
3. Apare a ponta do tubo capilar de vidro com uma tesoura, de modo que a ponta cônica tem um diâmetro interno de cerca de 0,5 mm.

Cisterna magna técnica de punção de LCR

Amostras de LCR são retirados da cisterna magna (Figura 1) usando um método que foi publicado anteriormente ^1.

Discussão

Nós descrevemos um protocolo altamente confiável para a amostragem de série do CSF ​​de ratos sem contaminação plasma detectável.

1. Todo o procedimento geralmente leva de 10 min por mouse (incluindo anestesia). O volume de LCR obtido é dependente da linhagens de camundongos. No PS / APP dupla camundongos Tg nós used2, o volume médio é de cerca de 5 mL (3-7 mL), enquanto o P301L (JNPL3) ratos 3 dão um rendimento de cerca de 10 ml-15 mL. Para a amostragem de série, um máximo de 7-8 mL podem ser tomadas com segurança a cada vez em um .......