טכניקה אוסף טורי של הנוזל השדרתי מן צ'יסטרנה מגנה על עכבר
Summary
טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF התקדמות המחלה בחולים אנושיים. כאן, אנו מדגימים מעודן צ'יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF סדרתי של העכבר.
Abstract
מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה ניוונית מתקדמת מאופיינת על ידי פתולוגית בתצהיר של תאי β עמילואיד פפטיד (Aβ) והצטברות intraneuronal של חלבון טאו hyperphosphorylated. בגלל נוזל המוח והשדרה (CSF) נמצא בקשר ישיר עם המרחב תאי המוח, הוא מספק השתקפות של שינויים ביוכימיים במוח בתגובה תהליכים פתולוגיים. CSF מחולים לספירה מראה ירידה בצורת חומצה אמינית 42 של Aβ (Aβ42), ועלייה טאו טאו סך hyperphosphorylated, אם כי המנגנונים האחראים שינויים אלה עדיין אינם מובנים במלואם. טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF עם התקדמות המחלה. כאן, אנו מדגימים מעודן צ'יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF מן העכבר. טכניקה זו מאפשרת דגימה עדין מאוד סדרתי דגימות CSF להיות המתקבל עכבר באותו חודש 2-3 במרווחים אשר מאוד מצמצם את ההשפעה של השתנות מבלבלים בין העכבר ברמות Aβ או טאו, כך שניתן לזהות שינויים עדינים לאורך זמן. בשילוב עם Aβ ו טאו ELISA, טכניקה זו יהיה שימושי עבור מחקרים שנועדו לבחון את היחס בין רמות של CSF Aβ42 ו טאו, חילוף החומרים שלהם במוח במודלים של העכבר לספירה. מחקרים בעכברים Tg יכול לספק אימות חשוב לגבי הפוטנציאל של Aβ CSF או רמות טאו לשמש סמנים ביולוגיים על התקדמות המחלה ניטור, כדי לפקח על ההשפעה של התערבויות טיפוליות. כמו עכברים אפשר להקריב את המוח ניתן לבחון שינויים ביוכימיים או היסטולוגית, המנגנונים שבבסיס השינויים CSF ניתן להעריך טוב יותר. נתונים אלה צפויים להיות אינפורמטיבי לפרשנות של שינויים CSF האדם לספירה.
Protocol
Discussion
אנו תיאר פרוטוקול אמין הדגימה הסידורי של CSF מעכברים ללא זיהום פלזמה לזיהוי.
1. ההליך כולו אורך בדרך כלל 10 דקות לכל עכבר (כולל הרדמה). נפח CSF שהושגו תלויה זנים העכבר. בעכברים PS / APP Tg כפול אנו used2, הנפח הממוצע הוא כ – 5 μl (3-7 μl), ואילו (JNPL3) עכברים P301L 3 נותן תשואה של …
Acknowledgements
העבודה שלנו היא נתמכת על ידי NIH מענקים NS048447 ו AG017216to KD. לי ליו רוצה להודות לד"ר הייקי Tanila (מאוניברסיטת קופיו, Kuopio, פינלנד) על הפיקוח שלו ואת התמיכה במהלך הפיתוח של הפרוטוקול המקורי.
Referências
- Liu, L., et al. Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice. Neurobiol Dis. 17, 516 (2004).
- Holcomb, L., et al. Accelerated Alzheimer-type phenotype in transgenic mice carrying both mutant amyloid precursor protein and presenilin 1 transgenes. Nat Med. 4, 97 (1998).
- Lewis, J., et al. Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein. Nat Genet. 25, 402 (2000).
- DeMattos, R. B., et al. Plaque-associated disruption of CSF and plasma amyloid-beta (Abeta) equilibrium in a mouse model of Alzheimer’s disease. J Neurochem. 81, 229 (2002).
- Planel, E., et al. Anesthesia leads to tau hyperphosphorylation through inhibition of phosphatase activity by hypothermia. J Neurosci. 27, 3090 (2007).
- Refolo, L. M., et al. A cholesterol-lowering drug reduces beta-amyloid pathology in a transgenic mouse model of Alzheimer’s disease. Neurobiol Dis. 8, 890 (2001).
