Una tecnica per la raccolta seriale del liquido cerebrospinale dalla Magna Cisterna in Mouse
Summary
Transgenici (Tg) modelli murini di AD forniscono un'eccellente opportunità per indagare come e perché i livelli di Aβ o tau nel liquido cerebrospinale cambiare il progredire della malattia nei pazienti umani. Qui, dimostrano una raffinata tecnica di puntura cisterna magna per il campionamento CSF seriale dal mouse.
Abstract
La malattia di Alzheimer (AD) è una malattia neurodegenerativa progressiva che è patologicamente caratterizzata dalla deposizione extracellulare del peptide β-amiloide (Aβ) e l'accumulo di intraneuronale iperfosforilata proteina tau. A causa del liquido cerebrospinale (CSF) è in contatto diretto con lo spazio extracellulare del cervello, fornisce un riflesso dei cambiamenti biochimici nel cervello in risposta a processi patologici. CSF di pazienti dC mostra una diminuzione del 42 aminoacidi forma di Aβ (Aβ42), e aumenta in totale iperfosforilata tau e tau, anche se i meccanismi responsabili di questi cambiamenti non sono ancora pienamente compreso. Transgenici (Tg) modelli murini di AD forniscono un'eccellente opportunità per indagare come e perché i livelli di Aβ o tau nel liquido cerebrospinale cambiare con la progressione della malattia. Qui, dimostrano una raffinata tecnica di puntura cisterna magna per il campionamento CSF dal mouse. Questa tecnica di campionamento estremamente delicata permette seriale campioni di liquido cerebrospinale di ottenere dal mouse stesso a intervalli di 2-3 mesi, che riduce sensibilmente l'effetto confondente della tra-mouse variabilità nei livelli di Aβ o tau, che consente di rilevare alterazioni sottili nel tempo. In combinazione con Aβ e tau ELISA, questa tecnica sarà utile per studi volti a indagare il rapporto tra i livelli di CSF Aβ42 e tau, e il loro metabolismo nel cervello in modelli murini dC. Studi nei topi Tg potrebbe fornire la convalida importante per il potenziale di Aβ CSF o livelli di tau per essere utilizzati come marcatori biologici per monitorare la progressione della malattia, e per monitorare l'effetto degli interventi terapeutici. Come i topi possono essere sacrificati e il cervello possono essere esaminati per cambiamenti biochimici o istologici, i meccanismi alla base dei cambiamenti CSF può essere meglio valutata. Questi dati sono suscettibili di essere informativo per l'interpretazione dei cambiamenti umani CSF dC.
Protocol
Discussion
Abbiamo descritto un protocollo altamente affidabile per il campionamento di serie del CSF da topi, senza contaminazioni plasma rilevabili.
1. L'intera procedura richiede solitamente 10 min per il mouse (incluso anestesia). Il volume di CSF ottenuti dipende dal ceppo di topi. Nella PS / APP topi doppio Tg abbiamo used2, il volume medio è di circa 5 microlitri (3-7 mL), mentre la (JNPL3) topi P301L 3 danno una resa di circa 10 microlitri-15 microlitri. Per il campionamento di serie, un massimo di 7-8 microlitri può essere tranq…
Acknowledgements
Il nostro lavoro è supportato dal NIH concede NS048447 e AG017216to KD. Li Liu desidera ringraziare il Dott. Heikki Tanila (Università di Kuopio, Kuopio, Finlandia) per la sua supervisione e supporto durante lo sviluppo del protocollo originale.
Referências
- Liu, L., et al. Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice. Neurobiol Dis. 17, 516 (2004).
- Holcomb, L., et al. Accelerated Alzheimer-type phenotype in transgenic mice carrying both mutant amyloid precursor protein and presenilin 1 transgenes. Nat Med. 4, 97 (1998).
- Lewis, J., et al. Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein. Nat Genet. 25, 402 (2000).
- DeMattos, R. B., et al. Plaque-associated disruption of CSF and plasma amyloid-beta (Abeta) equilibrium in a mouse model of Alzheimer’s disease. J Neurochem. 81, 229 (2002).
- Planel, E., et al. Anesthesia leads to tau hyperphosphorylation through inhibition of phosphatase activity by hypothermia. J Neurosci. 27, 3090 (2007).
- Refolo, L. M., et al. A cholesterol-lowering drug reduces beta-amyloid pathology in a transgenic mouse model of Alzheimer’s disease. Neurobiol Dis. 8, 890 (2001).
