Name: عزل خلايا فأر التجويف البريتوني (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-28T16:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: تعلم عزل خلايا التجويف البريتوني من الفئران لدراسة الاستجابات المناعية باستخدام تقنية حقن PBS مع تدليك ناعم. توفر هذه الطريقة 5-10 ملايين خلية سليمة للتحاليل المناعية الدقيقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة منح AI069358 ومؤسسة البحوث BloodCenter.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء في العملية ، في البنود التالية يجب أن يتم جمعها وإعدادها ل: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جليد </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5ml المحاقن مع إبرة 27G </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5ml المحاقن مع إبرة 25G </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الستايروفوم كتلة ودبابيس لتركيب الماوس </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدرج الذي يمكن أن توضع كتلة متزايدة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص وملقط </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة أنابيب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70 ٪ من الإيثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برنامج تلفزيوني مع 3 ٪ الجنين مصل العجل (FCS) (ما قبل المبردة ويحرص على الجليد) </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الماوس ، رش عليه مع الايثانول 70 ٪ وجبل على كتلة الستايروفوم على ظهرها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص وملقط قطع الجلد الخارجي للالصفاق وسحب بلطف مرة أخرى إلى تعريض الجلد الداخلي المبطن للتجويف البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 5 مل من الجليد الباردة PBS (FCS مع 3 ٪) في التجويف البريتوني باستخدام إبرة 27G. دفع الإبرة ببطء في الصفاق والحرص على عدم ثقب أي الأجهزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحقن ، والتدليك بلطف البريتوني لإزاحة أي خلايا يعلق في حل برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال ابرة ز 25 ، شطبة الأعلى ، تعلق حقنة 5 مل في الصفاق وجمع السائل أثناء تحريك رأس الإبرة بلطف لتجنب انسداد من الأنسجة الدهنية أو غيرها من الأجهزة. جمع أكبر قدر ممكن من السوائل ودائع تعليق الخلية التي تم جمعها في أنابيب أبقى على الجليد بعد إزالة الإبرة من المحاقن. اختياري : كرر الخطوة 4-6 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق في الجلد الداخلي للالصفاق وبينما جعل من الجلد مع ملقط استخدام البلاستيك باستور ماصة لتجميع السائل المتبقي من التجويف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوة إذا تم الكشف عن 6 أو 7 تلوث دم مرئي ثم ينبغي أن يكون تجاهل عينة ملوثة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور تعليق الخلية التي تم جمعها في 1500 دورة في الدقيقة لمدة 8 دقائق ، وتجاهل وطاف resuspend الخلايا في وسائل الإعلام المطلوب أو برنامج تلفزيوني عن العد. </li></ol> أثار بروتوكول بديلة للحصول على thioglycollate الضامة : وتستخدم هذه الطريقة للحصول على اعلى محصول الضامة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 5 مل من 3 ٪ (W / V) بروير thioglycollate المتوسطة (7) في التجويف البريتوني كل الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار لمدة 3-5 أيام ، والشروع في الخطوة 1 أعلاه لجمع الخلايا. </li></ol> بالمقارنة مع نهج nonelicited ، يمكن جمع ما يقرب من 10 مرات أكثر الضامة. القلق الوحيد هو أن الضامة التي حصل عليها هذا الإجراء تختلف في بعض خصائصها الفسيولوجية. ممثل النتائج : من الماوس unmanipulated ، يمكن الحصول على الخلايا 5-10000000 التجويف البريتوني مع بروتوكول العزل الجيد. بين جميع الخلايا الحية ، 50-60 ٪ من خلايا B ، ~ الضامة 30 ٪ و 5-10 ٪ من خلايا تي (الشكل 1). <img src="/files/ftp_upload/1488/1488fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. النمط الظاهري من الخلايا المعزولة من التجويف البريتوني. كانت ملطخة بعد العزلة من الخلايا التجويف البريتوني أنها معادية للماوس TCRβ - FITC ، B220 - PE - تكساس أحمر ، أزرق CD11b والمحيط الهادئ ، CD23 - PE - Cy7 وCD5 APC. قطع تدفق ممثل cytometric تظهر النسب المئوية للخلايا B و T (أ) ، الضامة (ب) ، B1 و B2 الخلايا (ج) و B1a وB1b الخلايا (د).

<ol><li>Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+and+characterization+of+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The isolation and characterization of murine macrophages.</a> Current Protocols in Immunology. , (2008).</li>
<li>Boes, M., Prodeus, A. P., Schmidt, T., Carroll, M. C., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+of+natural+immunoglobulin+M+in+immediate+defense+against+systemic+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A critical role of natural immunoglobulin M in immediate defense against systemic bacterial infection.</a> J. Exp. Med. 188, 2381-2386 (1998).</li>
<li>Mc Daniel, L. S., Benjamin, W. H., Forman, C., Briles, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+clearance+by+anti-phosphocholine+antibodies+as+a+mechanism+of+protection+in+experimental+pneumococcal+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Blood clearance by anti-phosphocholine antibodies as a mechanism of protection in experimental pneumococcal bacteremia.</a> J. Immunol. 133, 3308-3312 (1984).</li>
<li>Paciorkowski, N., Porte, P., Shultz, L. D., Rajan, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B1+B+lymphocytes+play+a+critical+role+in+host+protection+against+lymphatic+filarial+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B1 B lymphocytes play a critical role in host protection against lymphatic filarial parasites.</a> J. Exp. Med. 191, 731-736 (2000).</li>
<li>Mercolino, T. J., Arnold, L. W., Hawkins, L. A., Haughton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+mouse+peritoneum+contains+a+large+population+of+Ly-1%2B+%28CD5%29+B+cells+that+recognize+phosphatidyl+choline%3A+relationship+to+cells+that+secrete+hemolytic+antibody+specific+for+autologous+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Normal mouse peritoneum contains a large population of Ly-1+ (CD5) B cells that recognize phosphatidyl choline: relationship to cells that secrete hemolytic antibody specific for autologous erythrocytes.</a> J. Exp. Med. 168, 687-698 (1988).</li>
<li>O'Garra, A., Chang, R., Go, N., Hastings, R., Haughton, G., Howard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ly-1+B+%28B-1%29+cells+are+the+main+source+of+B+cell+derived+interleukin+10%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ly-1 B (B-1) cells are the main source of B cell derived interleukin 10.</a> Eur. J. Immunol. 22, 711-717 (1992).</li>
<li>Hoover, D. L., Nacy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+to+kill+Leishmania+tropica%3A+Defective+intracellular+killing+of+amastigotes+by+macrophages+elicited+with+sterile+inflammatory+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation to kill Leishmania tropica: Defective intracellular killing of amastigotes by macrophages elicited with sterile inflammatory agents.</a> J. Immunol. 132, 1487-1491 (1984).</li>
<li>Austin, P. E., McCulloch, E. A., Till, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+factor+in+L-cell+conditioned+medium+capable+of+stimulating+colony+formation+by+mouse+marrow+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture.</a> J. Cell Physiol. 77, 121-134 (1971).</li>
<li>Stanley, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macrophage+colony-stimulating+factor%2C+CSF-1%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The macrophage colony-stimulating factor, CSF-1.</a> Methods Enzymol. 116, 564-587 (1985).</li>
<li>Baumgarth, N., Chen, J., Herman, O. C., Jager, G. C., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+B-1+and+B-2+cells+in+immune+protection+from+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of B-1 and B-2 cells in immune protection from influenza virus infection.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 252, 163-169 (2000).</li>
<li>Baumgarth, N., Herman, O. C., Jager, G. C., Brown, L. E., Herzenberg, L. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B-1+and+B-2+cell-derived+immunoglobulin+M+antibodies+are+nonredundant+components+of+the+protective+response+to+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B-1 and B-2 cell-derived immunoglobulin M antibodies are nonredundant components of the protective response to influenza virus infection.</a> J. Exp. Med. 192, 271-280 (2000).</li>
<li>Berland, R., Wortis, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+functions+of+B-1+cells+with+notes+on+the+role+of+CD5%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 253-300 (2002).</li>
</ol>

عزل خلايا التجويف البريتوني هو تقنية هامة لدراسة الخلايا المناعية المختلفة ، الضامة في المقام الأول ومجموعات فرعية محددة الخلية باء. على الرغم من أن هذه عملية بسيطة ، وهناك بعض الخطوات الحاسمة المعنية. وينبغي تجنب وجود تلوث الدم في العينة التي تم جمعها للحصول على خلايا نقي التجويف البريتوني السكان. وينبغي أن يتم عن طريق القتل الرحيم خلع عنق الرحم بعناية لتجنب تلوث الدم في التجويف البريتوني. بدلا من ذلك يمكن استخدام ثاني أكسيد الكربون 2. بالإضافة إلى ذلك ، ينبغي خلال الرعاية الإجراء المناسب الواجب اتخاذها لتجنب ثقب في المثانة أو أي أجهزة أخرى في التجويف البريتوني. يتعافى معظم حقن السائل المهم أيضا أن العائد الخلية. ويستخدم على نطاق واسع هذا الإجراء لدراسة البيولوجيا بلعم منذ أعداد متوسطة من المقيمين ، ويمكن بسهولة الضامة unstimulated يمكن الحصول عليها من التجويف البريتوني ، خلافا لمهمة شاقة للتمييز الخلايا الاصلية في النخاعي الضامة ناضجة في المختبر ، وذلك باستخدام عامل تحفيز مستعمرة البلاعم (8 ، 9). ويمكن تحسين العائد بلعم من التجويف البريتوني باستخدام أسلوب الاستنباط thioglycollate ، على الرغم من استخدام thioglycollate قد يغير الخصائص الفيزيولوجية للالضامة (7). خلايا B هي جزء مهم من نظام المناعة لدينا تلعب أدوارا حاسمة في كل من الحصانة الفطرية والتكيفية. بين مختلف المجموعات السكانية الفرعية الخلية B ، B1 خلايا تضم ​​مجموعة فرعية فريدة من الخلايا باء المشاركة في الحصانة الفطرية ، والمناعة الذاتية وتنظيم المناعة. وتقع في المقام الأول خلايا B1 في التجويف البريتوني وتجديد الذات. فهي واحدة من المنتجين الأساسي للالغلوبولين المناعي الطبيعي الذي يوفر الخط الأول للحماية ضد عدد من الفيروسات والبكتيريا (10-12). الخلايا B1 هي أيضا مصدرا رئيسيا للIL - 10 (6) ، وهو خلوى هامة تشارك في تنظيم المناعة. وإن كانت قد اتبعت العديد من الدراسات مع الخلايا B1 ، لا يزال هناك مجال لمزيد من التقييم لمهامهم المتناقضة ، وخاصة دورها التنظيمي. البريتوني العزلة تجويف الخلية الأسلوب يوفر فرصة فريدة لدراسة وظائف الخلايا B1.

<table><tbody><tr><td>وسط الثيوجليكولات، تعديل بروير</td><td>BD Biosciences</td><td>211716</td><td></td></tr></tbody></table>

عزل خلايا فأر التجويف البريتوني

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

التجويف البريتوني هو غشاء التجويف محدد والسوائل تملأ البطن من الثدييات ، والذي يحتوي على الكبد والطحال ومعظم القناة الهضمية والأحشاء الأخرى. انها تؤوي عددا من الخلايا المناعية بما الضامة ، وخلايا B وخلايا T. وجود عدد كبير من السذاجة الضامة في التجويف البريتوني يجعله الموقع المفضل لجمع المقيم الأنسجة الضامة ساذجة (1). التجويف البريتوني مهم أيضا لدراسة الخلايا البائية بسبب وجود التجويف البريتوني فريدة المقيمة B فرعية الخلية المعروفة باسم خلايا B1 بالإضافة إلى الخلايا B2 التقليدية. وتنقسم الخلايا الى خلايا B1 B1a B1b والتي يمكن تمييزها عن طريق التعبير سطح CD11b وCD5. B1 الخلايا تشكل مصدرا هاما من الغلوبولين المناعي الطبيعي في وقت مبكر وتوفير الحماية من مجموعة متنوعة من العوامل الممرضة (2-4). هذه الخلايا هي autoreactive في الطبيعة (5) ، ولكن لا تزال كيفية السيطرة عليها لمنع المناعة الذاتية غير مفهومة تماما. على العكس من ذلك ، CD5<sup&gt; +</sup&gt; خلايا B1a تمتلك بعض الخصائص التنظيمية بحكم القدرة IL - 10 من إنتاج (6). لذلك ، البريتوني الخلايا B1 تجويف الخلية هي مثيرة للاهتمام السكان لدراسة بسبب وظيفتها المتنوعة والتي لم تعالج العديد من المسائل المرتبطة بالتنمية والتنظيم. عزل الخلايا المناعية التجويف البريتوني المقيم هو صعب بسبب عدم وجود بنية المعرفة داخل التجويف البريتوني. سيكون لدينا بروتوكول وصف إجراءات الحصول على الخلايا المناعية قابلة للتنفيذ من التجويف البريتوني من الفئران ، والتي يمكن استخدامها بعد ذلك لتحليل التدفق الخلوي بواسطة المظهري لمختلف المقايسات والبيوكيميائية والمناعية.

التجويف البريتوني في الثدييات يحتوي على مجموعات سكانية مختلفة عن الخلايا المناعية حاسمة الاستجابات المناعية الفطرية. مطلوب وسيلة فعالة لعزلة التحليلات الكيميائية الحيوية والوظيفية لهذه الخلايا. هنا نقدم وسيلة شاملة لعزل الخلايا التجويف البريتوني في الماوس.

التجويف البريتوني هو تجويف بطني في الثدييات، تحده أغشية ويمتلئ بالسوائل، ويحتوي على الكبد، والطحال، ومعظم الجهاز الهضمي...

تبدأ عملية عزل خلايا التجويف البريتوني بتثبيت فأر تم تخديره حتى الموت على ظهره. يتم قص الجلد الخارجي للبريتون وسحبه برفق للكشف عن الجلد الداخلي، ثم يُحقن PBS مع 3% FBS في التجويف البريتوني، ويتم تدليك البريتون بلطف. بعد ذلك، يتم جمع السائل الذي يحتوي على الخلايا البريتونية ووضعه في أنبوب سعة 15 milliliter على الثلج.تُغسل الخلايا مرة واحدة ثم تُعد باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer). مرحباً، أنا أوجي من مختبر الدكتور بون في معهد أبحاث الدم بمركز الدم في ويسكونسن. سنعرض لكم اليوم إجراءً لعزل الخلايا من التجويف البريتوني للفأر.نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا للحصول على خلايا لإجراء تحاليل نمطية وبيوكيميائية ومناعية متنوعة. ينصب اهتمامنا بشكل أساسي على مجموعات خلايا B البريتونية. لذا، فلنبدأ.قبل البدء في عزل الخلايا المناعية من التجويف الصفاقي، قم بتجهيز جميع المواد اللازمة. ابدأ بتجميع دلو ثلج، ومحقنة سعة خمسة مليلتر مع إبرة قياس 27، ومحقنة سعة خمسة مليلتر مع إبرة قياس 25، وكتلة من الفلين (ستيروفوم)، ودبابيس لتثبيت الفأر. كما يجب تجهيز صينية لحمل كتلة التثبيت، ومقص وملاقط وأنابيب تجميع قبل البدء في عملية التشريح.قم بتبريد محلول PBS الذي يحتوي على 3% fetal calf serum مسبقاً. احتفظ بهذا المحلول وأنابيب الجمع على الثلج طوال فترة التجربة. بعد إعطاء المخدر والقتل الرحيم المناسب، رش الفأر بـ 70% ethanol وثبته على ظهره فوق كتلة من البوليسترين أو لوحة تشريح. باستخدام الملقط والمقص، قم بقص الجلد الخارجي للبريتون.اسحب الجلد برفق للكشف عن الجلد الداخلي الذي يبطن التجويف البريتوني. مع الحرص على عدم ثقب أي من الأعضاء، ادفع ببطء إبرة قياس 27 في البريتون. احقن 5 mL من محلول PBS المبرد بالثلج في التجويف البريتوني.الآن، قم بتدليك الصفاق بلطف لتحفيز الخلايا على الانفصال عن جدار الصفاق والسقوط في محلول PBS. بعد ذلك، قم بتجهيز سرنجة سعة 5 مل بـإبرة مقاس 25 gauge بحيث تكون فتحة الإبرة متجهة للأعلى، ثم أدخل الإبرة في الصفاق. اجمع أكبر قدر ممكن من السائل لزيادة عدد الخلايا المستخلصة.أثناء القيام بذلك، حرك الطرف برفق لمنع الأنسجة الدهنية أو الأعضاء الأخرى من سد الإبرة. قم بإزالة الإبرة وتفريغ معلق الخلايا في أنابيب تجميع من البولي بروبيلين. اجمع السوائل المتبقية من التجويف عن طريق إجراء شق في الجلد الداخلي للبريتون.استخدم الملقط لإبعاد الجلد أثناء استخدام ماصة خلفية بلاستيكية لجمع أي سائل متبقٍ. وأخيرًا، قم بطرد مركّز معلق الخلايا لمدة ثماني دقائق بسرعة 1500 RPM، وتخلص من supernatant وأعد تعليق الخلايا في خمسة ملليلتر من PBS. عد الخلايا باستخدام hemo cytometer.سيتيح استخدام استبعاد صبغة trippen blue تحديد أعداد الخلايا. عادةً ما يمكن عزل من خمسة إلى 10 ملايين خلية من التجويف البريتوني لفأر لم يتم إجراء أي تلاعب به. وستشكل خلايا B نسبة 50 إلى 60% من إجمالي تعداد الخلايا.سيكون حوالي 40% من الخلايا عبارة عن بلاعم وخلايا حبيبية، ومن 5 إلى 10% ستكون خلايا T. لقد عرضنا لكم للتو كيفية عزل خلايا التجويف البريتوني من الفأر. عند استخدام هذا الإجراء، من المهم الحد من كمية الدم في مجتمع خلايا التجويف البريتوني عن طريق القتل الرحيم للفئران بعناية وعدم ثقب أي أعضاء في التجويف البريتوني.تأكد من التخلص من أي عينات تتلوث بالدم. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

isolation-of-mouse-peritoneal-cavity-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

يوصف مستحضر عالي النقاء من الخلايا الجذعية الماوس الرئة. ويولى اهتمام محدد لعزل الخلايا الجذعية التقليدية فرعية.

عزل خلايا الرئة ماوس شجيرى

في هذا الفيديو ، نوضح عزل الخلايا الليمفاوية عن رقعة Peyer التي تم حصادها من الفأر. يمكن استخدام الخلايا الليمفاوية المعزولة لمزيد من التحليل.

عزل الخلايا الليمفاوية من رقعة Peyer's Eye

&lt; p class = "jove_content" &gt;يوضح هذا الفيديو طريقة غسل بريتوني لعزل الخلايا البدينة الناضجة من نوع النسيج الضام من التجويف البريتوني للفئران البالغة. عند عزل خليط من الخلايا المناعية الأولية من التجويف البريتوني ، يتم إجراء التكاثر الانتقائي للخلايا البدينة في ظل ظروف الثقافة المناسبة.

تقنية لعزل الخلايا البدينة الأولية من تجويف الفئران البريتوني

هناك اهتمام متزايد في فهم وظائف مناعية المجموعات السكانية الفرعية معينة من الخلايا في بقع باير (PPS)، والمواقع الأساسية استقرائي من الأنسجة اللمفاوية الأمعاء المرتبطة. نحن هنا الخطوط العريضة لإعداد بروتوكولات موازية PP الاستعدادات خلية واحدة لتحليل تدفق cytometric وcryosections PP لالمناعية.

عزل والخلايا اللمفاوية المناعية والخلايا الجذعية من الفئران باير لالرقع

نصف هنا بروتوكولا بسيطا لعزل البلاعم البريتونية في الفئران. يتبع هذا الإجراء استخراج الحمض النووي الريبي لإجراء تحليل التعبير الجيني على تحفيز المستقبلات الشبيهة بالحصان.

عزل الفئران البريتوني الضامة لتنفيذ جين تحليل التعبير عند تول مثل مستقبلات تحفيز

نقدم هنا، بروتوكولا لعزل وزراعة الخلايا mast البريتوني مورين. يصف لنا أيضا بروتوكولين لتوصيف وظيفي على: تصوير فلورسنت داخل الخلايا الحرة Ca2 + تركيز ومقايسة تحبب استناداً إلى الكمي اللونية للمفرج عنهم β-هيكسوسامينيداسي.

عزل خلايا ماست المستمدة من الغشاء البريتوني وعلى التوصيف الوظيفي مع Ca2 +-التصوير وفحوصات تحبب

خلايا Enterochromaffin (EC) تضم مجموعة فرعية صغيرة من الخلايا الظهارية المعدية المعوية. خلايا الجماعة الأوروبية منفعل كهربائياً وإطلاق السيروتونين، بعد صعوبات في استزراع وتحديد خلايا الجماعة الأوروبية محدودة الدراسات الفسيولوجية. الطريقة المعروضة هنا تؤسس نموذج ثقافة الأولية قابلة للفحص لخلايا الجماعة الأوروبية الكهربية.

الكهربية كل خلية من خلايا Enterochromaffin موريني مثقف الأولية

هنا نوجز ونوضح بروتوكولا لعزل الخلايا البطانية الجيبية الأولية لكبد الفأر (LSEC). يعتمد البروتوكول على تروية كولاجيناز الكبد ، وتنقية الخلايا غير المتنية عن طريق الطرد المركزي منخفض السرعة ، واختيار الخرزة المغناطيسية CD146. نحن أيضا النمط الظاهري ونوصيف هذه LSECs المعزولة باستخدام قياس التدفق الخلوي والمجهر الإلكتروني الماسح.

عزل وتوصيف الخلايا البطانية الجيبية الأولية للكبد الفأر

هنا ، نقدم بروتوكولا لعزل اللحمة المتوسطة المعوية للفئران ، بما في ذلك الخلايا الطرفية. يمكن استخدامها في العديد من التطبيقات ، مثل الزراعة المشتركة مع الفئران أو الكائنات العضوية المشتقة من الإنسان ، لدعم النمو وتعكس بشكل أفضل الوضع في الأنسجة الأصلية.

عزل اللحمة المتوسطة المعوية للفئران مما يؤدي إلى غلة عالية من الخلايا التيلوسيتية

يصف هذا البروتوكول عزل وثقافة البلاعم المشتقة من نخاع العظم من الفئران.

عزل وثقافة البلاعم المشتقة من نخاع العظام من الفئران

تصف هذه الورقة طريقة للعزل المغناطيسي القائم على الخرزة للخلايا البطانية للفأر من الشعيرات الدموية اللمفاوية الجلدية. يمكن استخدام الخلايا البطانية اللمفاوية المعزولة في التجارب المختبرية وتحليل التعبير البروتيني.

عزل الخلايا البطانية اللمفاوية الجلدية للفأرين

تعلم عزل خلايا التجويف البريتوني من الفئران لدراسة الاستجابات المناعية باستخدام تقنية حقن PBS مع تدليك ناعم. توفر هذه الطريقة 5-10 ملايين خلية سليمة للتحاليل المناعية الدقيقة.

عزل خلايا فأر التجويف البريتوني

استكشف المزيد من الفيديوهات