עצם הכנת Undecalcified עבור היסטולוגיה, Histomorphometry וניתוח Fluorochrome

והיסטולוגיה של עצם נטולת אבנית מדגימה את המיקרו-ארכיטקטורה של העצם המציגה הן את המרכיבים המינרליים והן את המרכיבים התאיים של העצם, ומספקת מידע חיוני על תחלופת העצם או היווצרות וספיגת העצם. יש לכך חשיבות עצומה במגוון יישומים קליניים ומחקריים. הוא מספק תמונות יפות ומאפשר טכניקות כגון הערכת פלורו ואופטומטריית היסטו.

ביצוע תחת היסטולוגיה של עצם מסויידת הוא מאתגר מבחינה טכנית, במיוחד עם דגימות בגודל גדול. סרטון זה ידגים את הקשיים הטכניים והשיטות להתגבר עליהם בהשגת חלקים מסויידים של עצם. זה לא ייכנס להערכה מורפומטרית של קטעים אלה.

לשם כך אנו מפנים אותך לפרסום החשוב הבא. סרטון זה יכסה הכנת דגימה ועיבוד קיבוע, הטמעת חתך קרקע וחיתוך, הכנת שקופיות וצביעה לאחר איסוף רקמות. הדגימה.

במקרה זה, עמוד השדרה הצווארי של הכבשים מונח במיכל אטום ואטום המכיל פורמולה ותמיסה של 10% פוספט. צריכה להיות חשיפה מינימלית לאור אם יש לבצע ניתוח פלואורוכרום. מכיוון שהפלואורוכרום רגיש לאור, הדגימה נלקחת למעבדה ונחתכת לגודל, מה שמשפר את הקיבוע ומבטיח שהיא תתאים לבלוק.

אם כי יש לדעת את כיוון הרקמה על המגלשה בשלב זה כדי שניתן יהיה להכין את הבלוק במישור הנכון. הבטיחות חשובה מאוד ויש להשתמש במכשירים כך שהידיים יישמרו חופשיות מהלהב. אזור העניין שלהם מצטמצם כעת לגודלו.

לאחר מכן מבוצע חיתוך סופי עם מסור פס קטן יותר, מה שמביא לאובדן פחות רקמות. לאחר חיתוך גוש לגודלו, הוא מונח במיכל אטום ואטום המכיל פורמולה טרייה לקיבוע מלא. נפח המיכל צריך להיות בערך פי 10 מגודל הדגימה.

כדי להשיג קיבוע נאות, הדגימה צריכה להישאר בפורמולה ובתמיסה בין שבוע לשבועיים, תלוי בגודלה, ולאחר מכן היא מועברת ל-70% עיבוד אתנול מתבצע לאחר מכן בצורה איטית שכן הגודל הגדול של הבלוקים והחדירות הנמוכה של העצם גורמים לדיפוזיה איטית של ממסים. לאחר מכן ההתייבשות מתבצעת באמצעות ריכוזים עולים של אתנול ולאחר מכן פינוי בבוטנול. הדגימה נשמרת מוגנת מפני האור ותחת תסיסה מתמדת.

אנו ממליצים על כשבוע בכל פתרון. העיבוד, אם כן, לוקח כארבעה עד שישה שבועות. אין למהר בכך מכיוון שזה יפגע באיכות הסופית של הסעיפים.

ישנן מגוון אפשרויות הטבעה זמינות לעצם מסוידת. הבחירה בשרף או מתאקרילט תלויה במה שיש לבדוק. לדוגמה, אימונוהיסטוכימיה אינה אפשרית עם כל השרפים.

שרפי אפוקסי דורשים אור UV לריפוי, מה שיפריע לניתוח פלואורוכרום. אנו ממליצים להתייעץ עם מפרט היצרן לפני בחירה מדוקדקת. אנו משתמשים ב-TEVI 7, 100 מכיוון שזה מאפשר חתכים חתוכים וקרקעיים נחמדים למיקרוסקופ אור וניתוח פלואורוכרום והוא חסכוני.

השיקול החשוב בהטמעה הוא שיש להתאים באופן הדוק את צפיפות העצם ואת צפיפות מדיום ההטבעה. זה חשוב מאוד כאשר חותכים מאוחר יותר את הבלוקים, במיוחד לחיתוך מיקרו, מכינים את התערובת על פי הוראות היצרן ומנערים במרץ. אולי כדאי להטמיע דגימות חשופות של נתיך כדי לייעל את הפרוטוקול.

בניגוד לפרפין, זהו צעד בלתי הפיך. הבלוקים מונחים עם משטח חיתוך כלפי מטה לתוך התבנית. התבנית תהיה גדולה יותר מהבלוק כדי לתת תמיכה וחוזק.

יש לבצע החדרת מת' אקרילט לאט כדי לאפשר חדירה מקסימלית של המתאקרילט לעצם. שוב, יש למזער את חשיפת האור. לאחר שבוע תמיסת הסתננות, מחליפים את תמיסת ההסתננות ומוסיפים את תמיסת ההתקשות.

לאחר מכן מעוצבת לוחית גיבוי. אנו משתמשים בטווית ל מ לשם כך. לאחר מכן מקלפים את התבנית והבלוק מוכן כעת.

חתך קרקע מייצר חתכים גדולים יותר בעובי של 20 עד 50 מיקרון. זה שימושי לניתוח פלורו מכיוון שקטעים עבים יותר מייצרים פלואורסצנטיות בהירה יותר כדי לייצר את קטע הקרקע, יש צורך במיקרוטום, רצוי עם להב יהלום. אנו משתמשים בלהב יהלום עקומה של 0.6 מילימטר.

חומר סיכה הוא הכרחי. אנו מעדיפים חומר סיכה על בסיס נפט, אם כי גם חומרי סיכה מבוססי סיליקון עובדים היטב. לאחר מכן מניחים את הבלוק במהדק.

הוא מאובטח לתוך מונח המאקרו והבלוק מתקדם לכיוון הלהב. החלק הראשון חושף את פני החיתוך ומכוון את הקטע. יש להשליך אותו.

טחינה היא תהליך איטי ואין למהר בה. יש להבטיח שימון הולם כאשר הקטע נטחן. לאחר מכן הוא מונח על שקופית.

ניתן לנקות וללטש אותו לפי הצורך. לחלק יש נטייה להתכרבל, לכן אנו ממליצים להניח מעליו חלק משקית סנדוויץ' ולהחזיק אותו שטוח. עם מגלשה נוספת ננעצה במקומה.

לאחר מכן מכניסים אותו לאינקובטור של בין 60 ל-80 מעלות צלזיוס למשך שעה. זה מרכך מתקרילט ועוזר לקטע להיצמד למגלשה בצורה שטוחה. כאן אנו רואים תמונה פלואורסצנטית מרוכבת של שלושה כרומים פלואורוכרומים שונים המוזרקים במרווחי זמן חודשיים.

זה מאפשר זיהוי של אתר המינרליזציה בנקודת זמן מוגדרת. ניתן למצוא את המינונים וההכנה של תוויות אלה בטקסט. מונח המיקרו מספק חתכים דקים, המתאימים ביותר למיקרוסקופיה קלה.

זהו תהליך מאתגר מבחינה טכנית. אנו מציעים להשתמש במיקרוטון מזחלת בשל החוזק הנוסף שהוא מספק לחיתוך בלוקים קשים אלה. ניתן להשתמש במגוון להבים כולל להבי טונגסטן קרביד.

עם זאת, אנו ממליצים על להב נירוסטה מכיוון שניתן לחדד אותו בקלות ובתדירות גבוהה לפי הצורך. יש לכוון את הלהב כך שיהיה זווית של 45 מעלות עם בלוק. צפיפות המתאקרילט רגישה לגורמים רבים, כולל לחות הסביבה בחדר.

לכן יש לאחסן את הבלוק במשטח ייבוש. ניתן להשיג ריכוך על ידי מריחת נייר רטוב על הבלוק במידת הצורך, ייתכן שיידרשו מספר חלקים כדי להשיג את תנאי החיתוך הנכונים כדי לקבל חתך איכותי. שוב, שקית הסנדוויץ' והמגלשה הנוספת מהודקים כדי לשטח את החלק לפני שהוא מונח בחממה.

צביעה דומה להיסטולוגיה משובצת פרפין סטנדרטית, אלא שברור שאין צורך בשעווה. הכתמים הנפוצים המשמשים לעצם כוללים VSA עם כתם נגד זעפרן, זעפרן, ירוק בהיר ומסה על זהב כטריון. הפרוטוקול של אלה מוזכר בטקסט.

הריאגנטים נבחרים ומסוננים לפני השימוש. מוזהב. הכתם משמש לעתים קרובות לאופטומטריה היסטו. אנו ממליצים לייעל תחילה את הכתמים בשקופיות הבדיקה.

לאחר כל שלב, ניתן לצפות בשקופית תחת מיקרוסקופ כדי להבטיח את הצבעים הנכונים. זה מאפשר להשיג את הזמנים הנכונים עבור כל כתם רכיב. לאחר אופטימיזציה של תקן הכתמים, כל השקופיות מהניסוי מוכתמות בו זמנית במתלה עם אותו פרוטוקול כדי למנוע שונות מכתים המשפיעה על הגיאומטריה התרמית שלו.

לאחר מכן השקופיות יכסו החלקה בצורה סטנדרטית. אנו מאחלים לך בהצלחה בניסוי שלך.