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Capítulos
- 00:00Título
- 01:38Introduction
- 02:30Experimental Design
- 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
- 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
- 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
- 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
- 18:47Conclusion
Wir wenden label-free-Protein-Interaktion Analyse mittels Biacore X100 für Struktur-Funktions-Analyse der Bindung von mehreren Cystatin B-Mutanten durch kinetische Charakterisierung Papain. Calibration-free-Konzentration Analyse (EUFA) misst die Konzentration des Proteins mit behielt bindende Aktivität, ohne die Notwendigkeit für eine Standard-Kurve. Wir zeigen, dass die Bestätigung der Konzentrationen mit EUFA erhöht die Zuverlässigkeit der kinetischen Analyse und die kinetischen Konstanten zuverlässig bestimmt, auch wenn die Aktivität eines rekombinanten Proteins reduziert wird.
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Protein ConcentrationKineticsAffinity DeterminationStructure-function AnalysisCysteine Protease InhibitorCystatin BPapainReal-time Label-free AnalysisBiacore X100Point MutationsInteractionCalibration-free Concentration Analysis (CFCA)A280Single-cycle Kinetics (SCK)Association Rate Constant (ka)Affinity (KD)Reliable ResultsInteraction Mechanism
