Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Verwenden Sie eine überdachte Arena -- zum Beispiel eine Petrischale, die mit klarem Silikon gefüllt ist -- um sicherzustellen, dass Fliegen frei laufen können, aber nicht in der Arena fliegen können, wenn sie bedeckt ist. Platzieren Sie die Schale auf einer weißen beleuchteten Oberfläche und positionieren Sie eine Kamera direkt darüber.
Mit dem Deckel geöffnet, übertragen anästhesierte Fliegen in die Schale, decken Sie sie, und lassen Sie die Probanden erholen. Fliegen bewegen sich frei um die Arena während der Studie. Um die Fortbewegung zu bewerten, verfolgen Sie die Position jeder Fliege über die Zeit und berechnen Sie Parameter, die Die Fortbewegung charakterisieren, wie Die von jeder Fliege zurückgelegte Entfernung. In diesem Beispielprotokoll werden wir eine Demonstration der Assay-Einrichtung und -Analyse mit Video-Tracking-Software sehen.
- Um Fliegenbewegungen in einer Petrischale zu verfolgen, füllen Sie zuerst eine 6-Zentimeter-Schale mit transparentem Silikon-Elastomer, um die Tracking-Arena zu machen. Lassen Sie einen 3 Millimeter Abstand zwischen dem Silikon und dem Deckel, so dass Fliegen frei in der Lücke gehen können, aber nicht fliegen. Unter der Tracking-Arena, haben einen weißen Hintergrund.
Als nächstes befeuchten Sie vier Fliegen aus der gleichen Behandlungsgruppe und platzieren Sie sie in der Arena. Lassen Sie die Fliegen für eine Stunde zur Arena akklimatisieren, die vollständig beleuchtet sein sollte und bei etwa 22 Grad Celsius, nicht heißer als Raumtemperatur. Nach einer Stunde verwenden Sie eine aufgeladene Gerätekamera, die über der Arena positioniert ist, um die Aktivität der Fliege für 5 Minuten aufzuzeichnen.
Nach der 5-minütigen Aufnahme befeuchten Sie die Fliegen in der Arena und bringen Sie sie in eine neue Hausfläschchen zurück. Dann entsorgen Sie die Arena. Analysieren Sie später die Aufnahmen mit der frei verfügbaren Ctrax-Software. Diese Software erzeugt Tracking-Daten, die in einem programmierbar-sprachkompatiblen Format, wie dem MATLAB-Format, exportiert werden können.
Berechnen Sie aus den Daten die zurückgelegte Strecke pro Frame, die durchschnittliche Gehdistanz für jede Fliege und die durchschnittliche zurückgelegte Strecke pro Fliege. Für statistische Signifikanz erwarten Sie etwa 100 Fliegen pro Behandlungsgruppe zu testen.
