Encyclopedia of Experiments: Biology
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- तैराकी-induced पक्षाघात, या SWIP परख प्रदर्शन करने के लिए, स्थानांतरित L4 सी Elegans लार्वा एक गिलास जगह तरल से भरा प्लेट के लिए मंचन किया । विकासशील योनी की उपस्थिति से L4 hermaphrodites पहचान । शरीर के मध्य बिंदु पर एक आधा चाँद केआकार का पैच, और एक कोड़ा की तरह पूंछ ।
डोपामाइन-मध्यस्थता तैराकी का आकलन करने के लिए, सी के आकार के शरीर झुकने और पिटाई व्यवहार की विशेषता वाले कृमि के आंदोलन को रिकॉर्ड करें। आमतौर पर, डोपामिनेर्गिक न्यूरॉन्स डोपामाइन को सिनैप्टिक फांक में छोड़ते हैं, जो बदले में प्राप्त कोशिका पर डोपामाइन रिसेप्टर्स को बांधता है।
एक बार संदेश बीत जाने के बाद, डोपामाइन रिसेप्टर्स से जारी किया जाता है, और असाधक न्यूरोट्रांसमीटर को विशेष ट्रांसपोर्टर प्रोटीन के माध्यम से डोपामिनेर्गिक न्यूरॉन द्वारा लिया जा सकता है और पुन: उपयोग किया जा सकता है।
बदल डोपामाइन सिग्नलिंग के साथ लार्वा में, डोपामाइन ट्रांसपोर्टर या दवा उपचार में निष्क्रिय म्यूटेशन के कारण जो डोपामाइन रिलीज को बढ़ाते हैं, डोपामाइन सिनैप्टिक फांक में जमा होता है। अतिरिक्त डोपामाइन मोटर कार्यक्रम के साथ हस्तक्षेप करने वाले डोपामाइन रिसेप्टर्स को उत्तेजित करता है और लार्वा को लकवा मार जाता है। लार्वा जो स्थानांतरित करने में असमर्थ हैं, प्लेट के नीचे तक डूब जाएगा।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम एम्फेटामाइन के साथ इलाज किए गए सी एलिगेंस में मैनुअल और स्वचालित SWIP परख के विस्तृत प्रदर्शन देखेंगे।
- SWIP के मैनुअल मूल्यांकन के लिए, एक ग्लास स्पॉट प्लेट में 0.5-मिलीमोलर एम्फेटामाइन के साथ या उसके बिना नियंत्रण समाधान के 40 माइक्रोलीटर जोड़ें। एक स्टीरियोस्कोप के तहत, एक बरौनी लेने के साथ 8 से 10 देर एल4 चरण कीड़े चुनें, और कुएं में पिक को जलमग्न करें जब तक कि कीड़े लेने से दूर न चले जाएं और समाधान में तैरें।
टाइमर शुरू करें। कुएं में जारी कीड़े की संख्या पर ध्यान दें, और कुल 10 मिनट के लिए प्रत्येक मिनट के निशान पर SWIP प्रदर्शित कीड़े की संख्या का निरीक्षण और रिकॉर्ड करें।
प्रक्रिया के अंत में, कच्चे डेटा को स्प्रेडशीट में कॉपी करें और प्रत्येक मिनट में लकवा ग्रस्त कीड़े की संख्या को परख में परीक्षण किए गए कीड़े की कुल संख्या और 100 द्वारा गुणा करके लकवाग्रस्त कीड़े के प्रतिशत की गणना करें। किसी भी ग्राफिंग और सॉफ्टवेयर में प्रतिशत मूल्यों की प्रतिलिपि बनाई जाए और एक्स-एक्सिस पर SWIP के प्रतिशत मूल्यों के साथ डेटा को प्लॉट करें और एक्स-एक्सिस पर एक्स-एक्सिस पर एक्स-एक्सिस पर समय का उपयोग करके एक्स-एक्सिस पर समय के साथ डेटा को प्लॉट करें।
नियंत्रण और एम्फेटामाइन-उपचारित समूहों और उपचार के समय के बीच सांख्यिकीय विश्लेषण किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, दो तरह से ANOVA और पोस्ट हॉक विश्लेषण का उपयोग करके ।
तैराकी प्रेरित पक्षाघात के स्वचालित विश्लेषण के लिए, कैमरा, कीड़ा ट्रैकर सॉफ्टवेयर की स्थापना, और स्क्रिप्ट ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर विश्लेषण चलाने के लिए । और एक बरौनी लेने का उपयोग करने के लिए एक गिलास स्पॉट प्लेट में एक देर से चरण L4 कीड़ा जगह के रूप में पहले दिखाया गया है ।
फिर, एक बार में एक कीड़े के स्विमिंग वीडियो रिकॉर्ड करें, और शरीर के झुकती की आवृत्ति की गणना करने के लिए कीड़ा ट्रैकर सॉफ्टवेयर का उपयोग करें। कीड़ा पिटाई आवृत्ति प्राप्त करने के लिए ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ प्रदान की गई स्क्रिप्ट के बाद और कीड़ा पिटाई डेटा से गर्मी नक्शे उत्पन्न करने के लिए ।
