Encyclopedia of Experiments: Biology
É necessário ter uma assinatura JoVE para assistir este Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For at forberede Drosophila larver til en varmesondeanalyse, indsamle dyr i det ønskede udviklingsstadium og overføre enkelte larver til en testplade med en tynd film vand. Vandet gør det muligt for larverne at bevæge sig frit uden at klæbe til pladens overflade.
Drosophila larver opdage skadelige termiske stimuli gennem multidendritic sensoriske neuroner i deres epidermis kendt som nociceptors. Disse ikke brand, indtil en vis sensorisk tærskel er nået, såsom potentielt skadelige høje temperaturer.
Indstil varmesonden til en temperatur, der vil overvinde denne sensoriske tærskel, og få nociceptorerne til at skyde. Tryk forsigtigt spidsen af sonden mod larven for at anvende varme. Larven vil reagere på den skadelige temperatur med termo-nociceptiv adfærd og trække sig tilbage fra sonden. Stop, når larven udviser en 360-graders rolle væk fra varmesonden, eller når der er gået en bestemt tid.
I eksempelprotokollen vil vi se en demonstration af en lokaliseret varmesondeanalyse på tidlige tredje instar Drosophila larver.
- Først skal du forudindstille temperaturen på den termiske sonde til det ønskede sætpunkt. Brug en pensel eller pincet til forsigtigt at overføre en individuel larve på en flad platform, hvilket sikrer, at lavaen er dækket af en tynd film vand.
- For at minimere variationen i trykket, samt for at sikre den korrekte placering og vinkel af varmesonden, gør praksis perfekt.
- Tryk forsigtigt sondespidsen mod larven i segment A4 og tryk med spidsen i ca. 45 graders vinkel mellem sonden og larvens overflade. Trykket skal medføre en let indrykning på larvens overflade og vil normalt være tilstrækkeligt til at forhindre bevægelse.
Reagerende larver viser typisk først en foreløbig adfærd ved at løfte hoved og hale, efterfulgt af tilbagetrækningsadfærden ved at rulle mindst 360 grader. Når tilbagetrækningsadfærden er indledt, skal du frigive kontakt med sonden og registrere ventetiden eller den tid, det tager at trække. Hvis der ikke observeres tilbagetrækningsadfærd inden for 20 sekunder, er larven en ikke-responder.
