Nouvel essai de plongée de réservoir : une méthode pour étudier des réponses innées de stress dans zebrafish

- Pour commencer, placez une lumière infrarouge derrière le nouveau réservoir et une feuille d’acrylique blanche entre le réservoir et la lumière pour diffuser la lumière et empêcher l’éblouissement. Remplissez maintenant les 3/4 du réservoir avec de l’eau du système de poisson générée par osmose inverse de l’eau du robinet. Transférez un poisson acclimaté d’un réservoir de fixation à un bécher contenant de l’eau du système de poisson et laissez-le reposer encore 10 minutes. Ensuite, versez doucement l’eau et le poisson dans le nouveau réservoir.

À l’aide d’une image vidéo fixe pour trouver le haut, les zones moyennes et inférieures du réservoir en calculant la hauteur du réservoir et en le divisant par 3, déterminent le temps passé dans chaque zone et la distance totale parcourue à l’aide d’un logiciel de suivi. Un poisson adulte, lorsqu’il est placé dans un réservoir inconnu, montre habituellement une préférence pour la moitié inférieure, en raison du stress. À mesure que le niveau de stress diminue, il nage graduellement vers le sommet plus souvent. Testez au moins 10 poissons par expérience. Dans un protocole d’exemple, nous verrons la configuration expérimentale pour un nouveau test de plongée de réservoir.

- Commencez par remplir un bécher de 250 millilitres et au moins deux réservoirs de retenue avec de l’eau du système de poissons. Le matin de l’essai, transférer au moins 10 poissons zèbres adultes pour chaque condition expérimentale dans des réservoirs de retenue individuels avant de transférer tous les poissons à la salle de comportement pour l’aclimation pendant au moins une heure. Étiquetez les réservoirs de telle sorte que l’état ou le génotype des animaux est aveugle à l’expérimentateur, et utilisez un filet pour placer doucement un seul adulte dans le bécher prérembré.

Permettre aux poissons adultes de s’acclimater dans le bécher pendant 10 minutes avant de verser doucement l’eau et le poisson du bécher dans le nouveau réservoir expérimental. Dès que le poisson est dans le réservoir, commencer l’enregistrement de la caméra et s’éloigner de l’installation pour éviter une détresse supplémentaire pour le poisson. Lorsque l’enregistrement est terminé, retirez l’individu du nouveau réservoir et placez le poisson dans un nouveau réservoir de fixation.