Entrega de moléculas traçadoras na cisterna magna: um método para entregar moléculas traçadoras fluorescentes via canulação direta da cisterna magna em suínos

O cérebro dos vertebrados contém um sistema especializado de troca de fluidos análogo ao sistema linfático, chamado sistema glinfático. Nesse sistema, o líquido cefalorraquidiano ou LCR entra nos espaços periarteriais, permitindo a troca de solutos por meio de canais especializados presentes nos pés astrocíticos. O LCR transportador de soluto flui para o espaço perivenoso para liberar os solutos do cérebro. Essa via é significativa para a fisiologia do cérebro e pode ser visualizada usando moléculas traçadoras fluorescentes.

Para começar, prepare um porco anestesiado em decúbito ventral com a cabeça flexionada para cima. Faça uma incisão abaixo da crista occipital. Retraia os músculos para expor a cisterna magna - uma abertura no espaço subaracnóideo entre o cerebelo e a medula oblonga.

Insira cuidadosamente uma cânula através da dura-máter na cisterna magna. Aplique cola dental ao redor da cânula. Deixe endurecer. Em seguida, injectar moléculas traçadoras fluorescentes suspensas em LCR artificial a uma taxa adequada. Uma solução traçadora visivelmente pulsante na base da cânula confirma o sucesso da entrega.

Após a injeção, reposicione as camadas de tecido e suture a incisão. Coloque uma gaze de algodão úmida sobre a incisão para limitar a perda de calor. Deixe as moléculas traçadoras circularem pelo período desejado. Quando visualizadas sob um microscópio de fluorescência, as moléculas traçadoras ajudam a visualizar a distribuição do LCR no sistema glinfático.

Certifique-se de que uma pessoa eleve e flexione a cabeça e o pescoço do animal, enquanto a outra palpa a cisterna magna, anotando sua localização anatômica. Introduza uma cânula de calibre 22 lenta e cuidadosamente na cisterna magna através da dura-máter, em um ângulo oblíquo ao eixo longitudinal. Em seguida, retraia a agulha da cânula e coloque uma tampa na trava.

Comece aplicando supercola e um acelerador onde a cânula entra no tecido. Em seguida, aplique o cimento dentário. Aguarde cinco minutos para que o cimento endureça. Remova a tampa cuidadosamente da cânula. Prenda a cânula à extremidade macho da derivação da linha IV com o traçador usando uma extensão de 10 centímetros.

Injete o marcador lentamente a uma taxa de 100 microlitros por minuto, manualmente ou usando uma bomba de microinfusão. Remova a torneira da linha IV e substitua-a pela tampa. Verifique se o traçador está visível, pulsando na base da cânula. Em seguida, coloque sacos de areia sob o pescoço do animal para manter alguma flexão.

Solte a cabeça e deixe o animal em uma posição de repouso e de bruços. Solte os afastadores auto-retentores e substitua os músculos. Use os grampos de toalha cirúrgica para unir a pele sobre os músculos. Primeiro use gaze e, em seguida, um cobertor para cobrir os grampos da toalha e a incisão para limitar a perda de calor. Deixe o traçador circular pelo tempo desejado.