Coloração de polarização vermelha de Picrosirius: uma técnica para detectar fibrose em seções de tecido cardíaco usando microscopia de campo claro

A fibrose é um aumento da deposição de colágeno fibrilar na matriz extracelular do tecido danificado. Estruturalmente, compreende cadeias polipeptídicas de colágeno de tripla hélice.

Para corar o colágeno com corante vermelho picrosirius, faça uma seção de tecido cardíaco fixada em paraformaldeído e embebida em parafina. Mergulhe a seção de tecido em xileno - um solvente orgânico - para dissolver a cera circundante.

Trate sequencialmente o tecido desparafinizado com concentrações decrescentes de álcool para substituir o xileno. Mergulhe o tecido em água para reidratá-lo para melhor visualização da mancha nas etapas subsequentes.

Mergulhe o tecido em uma solução vermelha de picrosirius contendo vermelho de Sirius - um corante azo aniônico - e ácido pícrico.

O vermelho de Sirius contém grupos sulfônicos ácidos que interagem com os grupos amino básicos de lisina, hidroxilisina e arginina presentes no colágeno. O ácido pícrico ajuda a manter o pH ácido, facilitando a ligação das moléculas do corante em uma orientação paralela ao colágeno.

Enxágue as lâminas em uma solução acidificada para remover o excesso de manchas. Coloque uma gota de meio de montagem na lâmina e visualize-a sob um microscópio de campo claro.

A área fibrótica contendo colágeno aparece em vermelho brilhante em comparação com as regiões não fibróticas de cor amarela.

Depois de fixar o tecido cardíaco, coloque-o em um dispositivo de corte de tecido, corte-o em fatias de 2 milímetros de espessura e coloque as seções em um de incorporação.

Após a incorporação de parafina e seccionamento adicional de acordo com o protocolo de texto, desparafinize as lâminas colocando-as em um tanque com xileno por 30 minutos. Em seguida, reidratar o tecido em uma série de álcool diluído sequencialmente, seguido de água destilada.

Em seguida, use uma solução vermelha de picrosirius adequada para cobrir completamente as seções de tecido e incube por uma hora. Em seguida, use uma solução de ácido acético a 0,5% para enxaguar as lâminas duas vezes e enxágue as amostras duas vezes em álcool absoluto.

Seque as amostras ao ar livre e monte-as em resina sintética com uma lamínula. Em seguida, use luz visível sob um microscópio com ampliação de 200X para obter imagens das lâminas.