Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 5:32 min. • July 8th, 2025
As células hospedeiras infectadas por patógenos microbianos sofrem apoptose - morte celular programada. Durante a apoptose, as DNases degradam o DNA cromossômico em pequenos fragmentos, levando à morte celular.
Para detectar a apoptose usando o ensaio TUNEL, pegue uma lâmina de vidro com uma seção de tecido cutâneo desparafinizado e reidratado infectado com um patógeno fúngico.
Trate o tecido com proteinase-K para inativar as DNases celulares, evitando que elas degradem potencialmente o DNA durante a análise. Adicione peróxido de hidrogênio para extinguir a reação e lave a lâmina para remover a proteinase-K não reagida.
Adicione um tampão contendo trifosfatos de desoxiuridina marcados com digoxigenina, ou dUTPs. Suplemente-o com uma desoxinucleotidil transferase terminal, enzima TdT e incube. Em células apoptóticas, a enzima TdT catalisa a ligação de dUTPs marcados aos grupos 3'-hidroxila expostos do DNA fragmentado.
Em seguida, adicione um anticorpo anti-digoxigenina conjugado a um repórter de rodamina e incube-o no escuro para facilitar a ligação do anticorpo a dUTPs marcados com digoxigenina, transmitindo fluorescência vermelha na imagem.
Trate as amostras de tecido com uma cont
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos