Ativação de células B em uma lamínula revestida com antígeno

A ativação de células B envolve o reconhecimento de antígenos por receptores de células B, BCRs, em sua superfície para provocar uma resposta imune.

Para estudar a ativação de células B in vitro, comece com uma lamínula contendo antígenos e anticorpos anti-CD45R, imobilizados sobre um material polimérico. Os antígenos e anticorpos carregados negativamente interagem com polímeros carregados positivamente na lamínula por meio de interações eletrostáticas.

Cubra as lamínulas revestidas com um meio contendo células B e incuba. O CD45R - a proteína transmembrana das células B - interage com os anticorpos imobilizados, facilitando a adesão celular.

Os BCRs na célula B aderida interagem com um antígeno, formando uma sinapse imune - a região de coordenação para sinalização celular e internalização do antígeno. Isso promove a remodelação do citoesqueleto e inicia a disseminação celular, o que aumenta a superfície celular em contato com os antígenos.

A remodelação adicional causa o movimento de antígenos acoplados ao BCR em direção ao centro da sinapse imunológica. Esse rearranjo celular causa o reposicionamento do centrossomo próximo à membrana sináptica que guia as organelas intracelulares, incluindo os lisossomos, em direção à sinapse.

A fusão dos lisossomos com a membrana leva à internalização dos complexos antígeno-BCR. Os antígenos internalizados são processados em fragmentos de peptídeos, carregados no complexo principal de histocompatibilidade classe II ou moléculas de MHC e, finalmente, apresentados em células B ativadas.

Preparar a solução de antigénio adicionando anti-BCR e B220 em PBS até uma concentração final de 10 microgramas por ml e 7,5 microgramas por ml, respectivamente. Em seguida, coloque a lamínula sobre uma tampa de placa de 24 poços coberta com filme de parafina e adicione 40 microlitros de solução de antígeno. Sele a placa e incube a quatro graus durante a noite.

Para iniciar a ativação na lamínula, primeiro lave-os com PBS e deixe-os secar por alguns minutos. Em seguida, adicione 150.000 células B e incube a 37 graus para os diferentes pontos de tempo. Em ambos os casos, ao ativar com esferas ou lâminas revestidas de antígeno, recomendamos começar com o ponto de tempo mais longo e, em seguida, prosseguir para os mais curtos.