Hyperinsulinemic-Euglycemic зажим в Сознавая Крыса

Общая цель этой процедуры заключается в оценке чувствительности к инсулину у находящихся в сознании неограниченных крыс. Это достигается путем катетеризации левой сонной артерии. Затем проводится катетеризация правой яремной вены для обеспечения оптимальных результатов.

Катетеры промываются ежедневно для поддержания проходимости в течение пятидневного послеоперационного периода восстановления. В конечном счете, результаты могут быть получены с помощью гиперинсулинемического U-гликемического зажима, который показывает скорость инфузии глюкозы во всем организме. Основное преимущество этого метода заключается в том, что прямые измерения скорости утилизации глюкозы во всем организме могут быть получены при высоком физиологическом уровне инсулина.

Артериальные и венозные катетеры должны быть подготовлены до начала хирургического вмешательства. Катетер должен иметь тупые концы, быть заполнен гепаринизированным физиологическим раствором и стерилизован этанолом с помощью удерживающего удара, надежно прикрепленного на расстоянии 2,7 или 3,2 сантиметра от одного конца для артериальных и венозных катетеров соответственно. В этой процедуре используются взрослые самцы спрей долли крыс весом около 300 грамм.

Запишите начальный вес животного и используйте этот вес для мониторинга набора веса после операции. Работа в асептической хирургической зоне. Обезболите крысу 3%-ным изофтором, поместив ее в коробку с анестетиком.

Перенесите животное подальше от операционной области и подготовьте место разреза, удалив шерсть вокруг шеи и плеч. После удаления шерсти поместите животное в носовой конус, чтобы поддерживать анестезию примерно с 2% изофтора. Закрепите животное на хирургическом столе.

Убедитесь, что крыса полностью обезболивается, проверив наличие рефлексов стопы и/или глаз. Очистите место разреза 70% этанолом, затем нанесите скраб с бетадином и снова 70% этанолом. Первым этапом процедуры является выполнение небольшого вертикального разреза по средней линии на 10 миллиметров выше грудины.

Используйте изогнутые микрорассекающие щипцы, чтобы притупить рассекаемую ткань и обнажить левую грудинную сосцевидную мышцу. Отразите эту мышцу, чтобы обнажить примерно один сантиметр левой сонной артерии. Поместите микрорассекающие щипцы под сонную артерию, чтобы удерживать ее на месте, аккуратно удаляя соединительную ткань.

Важно изолировать блуждающий нерв от артерии, не повреждая ни артерию, ни нерв. Используйте стерильный шелковый шов для перевязки цефаладного конца. Зажмите сосуд зубчатыми микрорассекающими щипцами.

Проколите перевязанное. В конце установите адаптер для приманки 21 калибра ven eject multis sample. Извлеките пробку из нержавеющей стали из катетера и используйте стерильный интродьюсер для введения в артерию.

Используйте щипцы, чтобы убедиться в надежности катетера. Частично. Отпустите микрорассекающие щипцы, зажимая артерию, и продолжайте вводить катетер до бусины. В этот момент кончик катетера должен находиться в дуге аорты.

Закрепите два шва ниже бусины и один выше, и промойте линию 10 единицами на миллилитр гепаринизированного физиологического раствора. Чтобы убедиться, что катетер будет взят образцом, заткните внешний конец катетера заглушкой из нержавеющей стали. Далее тупым образом рассеките ткань Чтобы обнажить правую наружную яремную вену, тщательно изолируйте вену и перевяжите головную.

Завершите шелковым швом. Проколите вену веной 21 калибра. Извлеките адаптер приманки для нескольких образцов.

Извлеките пробку из нержавеющей стали из катетера и с помощью стерильного интродьюсера катетера вставьте ее до бусины. Закрепите два шва ниже бусины и один сверху. И промойте линию 10 единицами на миллилитр гепарина ледяного раствора.

Чтобы убедиться в том, что катетер будет образцом, повторно закупорьте внешний конец катетера пробкой из нержавеющей стали с помощью тупого игольчатого туннеля 14 калибра под кожей и сделайте надрез сзади между лопатками. Далее проденьте катетеры через иглу так, чтобы они выходили из спины крысы. Примерно четыре сантиметра каждого катетера должны быть видны.

Отрежьте 0,5 сантиметра медицинской трубки Tigon S 50 HL и поместите ее вокруг обоих наружных катетеров. Закрепите синей лентой для вен и красной для артерий. Повторно протестируйте катетеры для обеспечения проходимости, а затем промойте и заполните 150 единиц на миллилитр гепаринизированным физиологическим раствором для предотвращения свертывания.

Закройте все разрезы тремя шелковыми швами. Поместите крысу в положение лежа в заранее предупрежденную чистую клетку с легкодоступным кормом. Как только крыса полностью восстановит способность к передвижению и бдительность, верните ее в домашнюю клетку.

Дайте крысе восстановиться в течение трех-пяти дней, ежедневно отслеживая инфекцию, боль и изменения веса. Важно, чтобы проходимость катетера сохранялась на протяжении всего исследования. Каждый день после операции наполняйте один миллилитровый шприц 150 единицами гепаринизированного физиологического раствора на миллилитр и закрывайте их тупой иглой 22 калибра.

Тупая игла вставляется в трубку PE 50 диаметром 20 сантиметров с муфтой из нержавеющей стали 23 калибра на другом конце. Обязательно удалите все пузырьки воздуха из магистрали Пережмите артериальную магистраль, выведенную наружу от крысы гемостатиком. Чуть ниже вилки.

Снимите стальную пробку катетера с помощью другой пары гемостатиков. Вставьте соединительную трубку, соединенную со шприцем, в артериальный катетер и освободите гемостатики, окклюзирующие наружный артериальный катетер. Далее аспирируйте артериальную кровь катетера в шприц.

Если катетер не втягивается легко, может потребоваться очень осторожно ввести небольшое количество раствора через катетер, чтобы сместить кончик. Катетер считается очищенным. Когда кровь достигнет шприца, зажимите трубку P 50 рядом с одномиллилитровым шприцем и утилизируйте шприц.

Замените на новый шприц, наполненный свежим гепарином ледяным раствором. Разожмите трубку и, держа новый шприц в вертикальном положении, взмахните новым шприцем, чтобы выбить пузырьки воздуха вверх и в сторону от магистрали. Вводите гепаринизированный физиологический раствор до тех пор, пока катетерная линия не станет прозрачной и свободной от крови.

Зажмите артериальный катетер чуть ниже муфты трубки. Снимите соединитель шприца с артериальной катетерной магистрали и замените его пробкой трубки из нержавеющей стали. Освободите гемостатик от окклюзии, наружный артериальный катетер.

Повторите эту процедуру для венозной линии. Из-за низкого венозного давления отбор проб может быть невозможен. В целом, если гепаринизированный физиологический раствор может быть введен с минимальным сопротивлением, вполне вероятно, что катетер хорошо расположен в вене.

Перед началом процедуры животное должно быть взвешено, приготовлены растворы и собран зажимной аппарат После взвешивания животного и подтверждения проходимости катетера поместите его в небольшой контейнер с подстилкой, которая ограничивает, но не ограничивает движения. Крысы, использованные в этом исследовании, голодали не менее пяти часов и выполнили послеоперационные потребности по набору веса. Вес крысы определяет количество необходимого здесь инсулина.

Четыре миллиединицы на килограмм в минуту вводится со скоростью два микролитра в минуту. Приготовьте 50% раствор декстрозы и убедитесь, что обоих растворов достаточно, чтобы хватило примерно на два часа, здесь используются три миллилитровых шприца. Теперь вы готовы к сборке зажимного аппарата.

Настройте трубопроводы и инфузионные насосы, как показано на рисунке. Поместите шприцы с глюкозой и инсулином на шприцевую помпу. Зажмите стропы и дайте крысе отдохнуть в течение 30 минут перед началом эксперимента.

Чтобы начать процедуру, возьмите исходный уровень инсулина и образец гематокрита, который обеспечивает сохранение объема крови на протяжении всего эксперимента. Как правило, уровень гематокрита не должен падать более чем на 10% от исходного значения. Получите исходный образец глюкозы и определите уровень глюкозы, который необходимо зажать.

Здесь зажимаем на U гликемию или пять миллимоляров. После каждого образца крови промывайте артериальную магистраль небольшим объемом 10 единиц на миллилитр гепаринизированного физиологического раствора для предотвращения свертывания. После определения уровня глюкозы, подлежащей пережатию, приступают к вливанию раствора инсулина.

Записывайте уровень глюкозы в крови с интервалом от пяти до 10 минут и регулируйте скорость инфузии глюкозы по мере необходимости до тех пор, пока не будет достигнуто устойчивое состояние. Как правило, это процесс проб и ошибок, который может занять от 30 минут до более чем двух часов. Уровень глюкозы, необходимый для поддержания гликемии, зависит от протокола эксперимента.

Виды и условия присутствуют, чтобы считаться зажатыми, три последовательных показания должны находиться в определенном диапазоне. Три показания в пределах примерно одного миллимольяра друг от друга означают, что уровень глюкозы достиг устойчивого состояния. Скорость инфузии глюкозы необходима для поддержания гликемии в течение 30-минутного периода, дополнительные образцы крови могут быть получены в течение этого времени как минимум.

Второй образец гематокрита инсулина в плазме крови должен быть собран после завершения процедуры зажима. Животные могут быть использованы для дальнейшего тестирования или усыплены в тканях, собранных для дальнейшего анализа. В зависимости от животного, катетерные катетеры могут оставаться чистыми в течение пяти-семи дней при правильном выполнении.

Процедура зажима позволяет измерить чувствительность к инсулину в стационарном состоянии. Важно регистрировать уровни инсулина и глюкозы, а также скорость инфузии глюкозы и показатели гематокрита. Устойчивое состояние достигается, когда уровни глюкозы остаются в пределах одного миллимольяра друг от друга в течение 30-минутного периода времени.

Скорость инфузии глюкозы показывает уровень экзогенной глюкозы, необходимый для поддержания U-гликемии, где это возможно, скорость должна быть привита с течением времени, а не в одну среднюю временную точку. Следует сообщать как об уровне инсулина натощак, так и об уровне зажатого инсулина. Эти меры подтверждают, что инсулин был доставлен успешно, и обнаружат любые различия в реакции инсулина между группами лечения, измеряя уровни гематокрита на исходном уровне, и снова после процедуры гарантируют, что уровни не упали более чем на 5% от исходного уровня в течение эксперимента после этой процедуры.

Другие методы, такие как введение изотопных индикаторов, могут быть использованы для оценки утилизации глюкозы в организме всего организма и тканей.