Contraction artère mésentérique et des études de relaxation utilisant myographie fil automatisé

Cette procédure utilise des rats modèles sensibles et résistants au sel afin de comparer la réactivité des artères mésentériques de résistance sous tension induite par la phényléphrine en réponse au calcium extracellulaire. Pour ce faire, on isole d'abord l'arcade mésentérique chez les animaux, puis on dissèque les branches artérielles de résistance. Ensuite, un premier des deux fils en acier inoxydable est passé à travers un court segment de l'artère disséquée, et le vaisseau est monté dans la chambre de myographie.

Ensuite, un deuxième fil en acier inoxydable est passé à travers la lumière du vaisseau en parallèle avec le premier fil. Puis, le vaisseau monté est étiré jusqu'à atteindre une circonférence interne normalisée. La dernière étape de la procédure consiste à réactiver le vaisseau en le stimulant par des applications répétées de phényléphrine et en le relaxant par des applications cumulatives de calcium.

En fin de compte, les résultats montrent des variations de la tension dans le vaisseau, qui peuvent être converties en une courbe de réponse calcique et utilisées pour déterminer les valeurs de CE 50. À titre de comparaison. Nous avons eu l'idée d'utiliser cette méthode lorsque nous avons découvert que le réseau név des batteries de Mason de rat exprimait un récepteur sensible au calcium de type gpro cuivre.

Cela peut être étudié de la même manière que les récepteurs AIC amers, qui sont activés par un agoniste. En général, les personnes novices dans cette méthode peuvent éprouver des difficultés car les couches endothéliale et musculaire lisse sont minces. Les vaisseaux sont facilement endommagés.

Si cela se produit, les propriétés mécaniques de ces vaisseaux peuvent être compromises. Commencez par préparer le secteur de travail et les instruments chirurgicaux. Placez un animal anesthésié sur le dos et nettoyez l'abdomen avec de l'alcool.

Après avoir réalisé une laparotomie médiane, utilisez des ciseaux pour prélever environ 85 centimètres d'intestin, y compris l'artère mésentérique supérieure. Sectionnez l'extrémité proximale près du pylore et l'extrémité distale près de la jonction iléocæcale. Placez le segment excisé dans une boîte de Pétri revêtue contenant une solution saline physiologique ou SSP à température ambiante.

Fixez l'extrémité proximale de l'intestin à droite, puis fixez le reste de l'intestin dans le sens inverse des aiguilles d'une montre. Ensuite, disséquez un segment de l'artère mésentérique contenant les branches deux et trois ainsi qu'un fragment de l'intestin à partir de l'extrémité proximale. Identifiez le point de bifurcation en forme de V de l'artère mésentérique et disséquez-le en le séparant de la veine.

Utilisez une pince pour retirer délicatement le tissu adipeux et conjonctif afin d'éviter tout contact direct avec l'artère. Pour commencer le montage du vaisseau, coupez deux segments artériels d'environ deux millimètres de longueur. L'extrémité d'un fil d'acier inoxydable sans tungstène de quatre centimètres de long et de 40 micromètres de diamètre peut être utilisée pour ouvrir la lumière de l'artère.

Ensuite, utilisez une pince fine pour insérer le fil dans la lumière de chaque artère. En prenant soin de ne pas endommager l'endothélium, remplissez la chambre du greffon myogène avec du PSS à 37 degrés Celsius. Utilisez la pince pour transférer le segment de vaisseau enfilé dans la chambre.

Ensuite, transférez le segment vasculaire proximal excisé dans la chambre du myographe et faites glisser l'extrémité le long du fil pour l'introduire dans le vaisseau. Évitez d'étirer le vaisseau. Fixez l'extrémité proche du fil en sens antihoraire sous la vis de fixation proche située sur la mâchoire droite reliée au micromètre.

Attrapez l'extrémité libre du fil avec une pince et fixez-la en sens horaire sous la vis de fixation éloignée sur la mâchoire droite ; assurez-vous que le segment de vaisseau le long du fil se trouve dans l'entrefer entre les mâchoires sans entrer en contact avec la mâchoire elle-même. Vissez les mâchoires pour les écarter. Alignez le deuxième fil parallèlement au vaisseau et insérez-le dans l'extrémité distale de la lumière.

Introduisez délicatement le fil à travers la lumière du segment vasculaire d'un seul mouvement, en utilisant le fil déjà en place comme guide. Tenez le fil à environ un centimètre du vaisseau pour éviter de l’étirer pendant la manœuvre, et évitez de toucher l’endothélium. Vissez les mâchoires ensemble et assurez-vous que le deuxième fil de montage passe sous le premier, qui est fixé du côté droit.

Fixez l'extrémité proche du deuxième fil dans le sens horaire sous la vis de fixation proche de la mâchoire gauche reliée au transducteur. Fixez l'extrémité éloignée du fil sous la vis de fixation de la mâchoire gauche et serrez pour tendre le fil. Une fois le montage terminé, laissez 30 minutes d'équilibre à 37 degrés Celsius.

Après l'équilibre, le moteur est réinitialisé depuis le menu de montage et la procédure de normalisation, qui étire le vaisseau jusqu'à une circonférence interne normalisée, est lancée. Pour commencer, ouvrez le menu de normalisation et réglez la pression transmurale cible à 13,3 kilopascals. Ensuite, réglez la durée de chacune des étapes de normalisation à 60 secondes.

Le rapport entre l'IC un et l'IC 100 doit être égal à 0,9 et l'étalonnage de l'IP doit être réglé sur deux étoiles delta. Mesurer la longueur de l'artère mésentérique montée à l'aide des graduations de l'oculaire du microscope lorsque les fils sont placés sur les extrémités et les neurones du segment de vaisseau. Après la normalisation, les vaisseaux sont réactivés en effectuant un démarrage standard composé d'une série de stimulations et de périodes de lavage.

Tout d'abord, remplacez le couvercle de la chambre myo et commencez l'aération avec 95 % d'air et 5 % de dioxyde de carbone. Remplissez la chambre avec du PSS frais contenant 100 micromolaire d'acide ascorbique. Contractez le vaisseau avec 5 micromolaires de fennel, rine ou PE pendant cinq minutes, puis rincez quatre fois avec du tampon PSS. Après le dernier rinçage, remplissez à nouveau la chambre avec du PSS et attendez trois minutes avant de la remplir de nouveau avec du PSS et de contracter avec du PE. Comme indiqué précédemment, l'artère est désormais prête pour l'expérience.

Mesurez le relâchement des vaisseaux contractés en ajoutant de manière cumulative des concentrations croissantes de chlorure de calcium. Ce tableau montre que les tensions basales après l'application de phényléphrine variaient entre les rats Wistar DS ou Doll sensibles au sel et les rats DR ou Doll résistants au sel. Ce tracé provenant d'un rat Wistar illustre le relâchement des artères contractées par la phényléphrine grâce à des ajouts cumulatifs de calcium, relâchement fortement altéré dans les tissus des rats DS par rapport aux rats Wistar et par rapport aux rats DR. Comme on le voit ici, les différences de sensibilité au calcium apparaissent dans les courbes de réponse au calcium et, là encore, lors du calcul des valeurs de CE 50.

Enfin, les rats DS présentent une réduction de l'expression du récepteur calciorécepteur dans les artères par rapport aux rats Dr.Rats Once mastered. Cette technique peut être réalisée en deux heures si elle est effectuée correctement. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de comparer la réactivité vasculaire de petits artérioles mésentériques à un composé exogène dans des conditions isométriques.