Journal
/
Biologia
/
Overvåking av Ubiquitin-proteasome aktivitet i levende celler ved hjelp av en Degron (DGN)-destabilisert grønt fluorescerende protein (GFP)-baserte reporter Protein
JoVE Journal
Biologia
Author Produced
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Biologia
Monitoring of Ubiquitin-proteasome Activity in Living Cells Using a Degron (dgn)-destabilized Green Fluorescent Protein (GFP)-based Reporter Protein

Overvåking av Ubiquitin-proteasome aktivitet i levende celler ved hjelp av en Degron (DGN)-destabilisert grønt fluorescerende protein (GFP)-baserte reporter Protein

DOI:
10.3791/3327-v

•

10:25 min

•

November 10, 2012

•

, , , ,
1Molecular and Cell Biology,Institute for Biomedical Aging Research, 2Department of Gerontology and Geriatrics, Netherlands Consortium for Healthy Aging,Leiden University Medical Center

Capítulos

  • 00:00Título
  • 01:21Virus Production
  • 04:11Titering of Virus
  • 06:13Transduction of Human Diploid Fibroblasts
  • 07:19FACS Experiments
  • 08:50Proteasomal Activity in vivo
  • 10:04Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

En metode for å overvåke ubiquitin-proteasom aktivitet i levende celler er beskrevet. En degron-destabilisert GFP-(GFP-DGN) og en stabil GFP-dgnFS fusjonsprotein genereres og transduced inn i cellen ved hjelp av en lentiviral ekspresjonsvektor. Denne teknikken gjør det mulig å generere en stabil GFP-dgn/GFP-dgnFS uttrykke cellelinje der ubiquitin-proteasom aktivitet kan lett vurdert ved hjelp epifluorescence eller flowcytometri.

Tags

Ubiquitin-proteasome ActivityDegronGreen Fluorescent Protein (GFP)Reporter ProteinProteolysisIntracellular OrganelleAbnormal ProteinsMisfolded ProteinsDamaged ProteinsOxidized ProteinsProteasome MaintenanceCellular ProcessesStress ResponseCell Cycle RegulationCellular DifferentiationImmune System ResponseUbiquitin-proteasome System DysfunctionTumorsNeurodegenerative DiseasesCellular SenescenceOrganismal AgingPrimary CellsLentiviral Expression VectorsTransfection Efficiency

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/3327?article_type=v

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid
check_url/pt/3327?article_type=v

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery
check_url/pt/3327?article_type=v

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun
check_url/pt/3327?article_type=v

Photobleaching Assays (FRAP & FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells
check_url/pt/3327?article_type=v

Sammen Analyser for Monitoring Protein Refolding i<em> Saccharomyces cerevisiae</em
check_url/pt/3327?article_type=v

Gransker Protein-protein interaksjoner i levende celler ved hjelp Bioluminesens Resonance Energy Transfer
check_url/pt/3327?article_type=v

siRNA Screening for å identifisere Ubiquitin og Ubiquitin-lignende system regulatorer av biologiske mekanismer i dyrkede pattedyrceller
check_url/pt/3327?article_type=v

Reporter-baserte vekstanalyse for systematisk analyse av protein degradering
check_url/pt/3327?article_type=v

Genome-wide Protein-protein Interaksjon Screening av Protein-fragment Komplemente analyse (PCA) i levende celler
check_url/pt/3327?article_type=v

Grønn Fluorescent Protein-baserte Expression Screening av membran proteiner i<em> Escherichia coli</em

Read Article