É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Título
- 02:28Fly Cup Preparation and Embryo Collection
- 04:00Embryo Homogenization and Clarification
- 04:48Microtubule Polymerization, Kinesin Binding and Differential Sedimentation of Microtubules and Kinesin
- 06:49Representative Kinesin Purification Results
- 08:29Conclusion
Dit is een protocol om actief volle lengte Kinesine isoleren van<em> Drosophila</em> Embryo's voor single-molecule biofysische studies. We laten zien hoe om embryo's te verzamelen, maken het embryo lysaat, en dan polymeriseren microtubuli (MT). Kinesine wordt gezuiverd door immobiliseren van het op de MTS, te stoppen met draaien de kinesine-MT complexen, en dan het vrijgeven van de kinesine van het MT via ATP toevoeging.
Tags
IsolationPurificationKinesinDrosophila EmbryosMotor ProteinsMicrotubulesSub-cellular LocationsNeurodegenerative DiseasesTherapeutic ApproachesATP HydrolysisPurification ProtocolGenéticaSingle-molecule Biophysical StudiesLaying CupsFemales Per CupOvernight CollectionsBleach DechorionatedHomogenizedLow Speed SpinHigh Speed CentrifugationClarified SupernatantGTP And TaxolPolymerize MTsImmobilized On Polymerized MTsATP AnalogAdenylyl ImidodiphosphateRoom TemperatureMicrotubule Pellet
