Определение количества клеток млекопитающих, размер ячейки и клеточной здравоохранения на основе использования Moxi Z Мини Автоматизированная Сотовые Счетчик

Автоматический счетчик клеток Mxi Z Mini — это сверхкомпактный настольный прибор, который выполняет высокоточный подсчет клеток и частиц. Благодаря сочетанию золотого стандарта TER с запатентованной технологией тонкопленочных датчиков. Кассеты, используемые с Mxi Z, представляют собой прецизионные микрофлюидные датчики для подсчета клеток.

Кассета вставляется в переднюю часть устройства, и 75 микролитров образца загружается в порт для отбора проб. Когда начинается прогон, клетки протягиваются одним файлом через зону чувствительности клеток в тонкопленочной мембране кассеты, тысячи клеток на образец учитываются по мере их прохождения через зону восприятия. Точный объем каждого из них определяется с помощью измерения импеданса.

Через восемь секунд концентрация клеток, средний размер клеток и индекс здоровья клеток отображаются вместе с полной гистограммой высокого разрешения всей популяции частиц. Данные образца затем могут быть проанализированы и сохранены на самом приборе или переданы на Mac или PC через Bluetooth или USB. Основное преимущество этого метода перед другими системами, такими как гемо, цитометры или автоматические счетчики клеток на основе изображений, заключается в том, что он гораздо более надежен с точностью и точностью более 95% по сравнению с 75-80% в системах на основе изображений.

Кроме того, он измеряет размер клеток, и это намного быстрее и не субъективно. Хотя этот метод может быть идеальным из миллиона подсчетов клеток. Он может быть применен к широкому спектру приложений для подсчета клеток благодаря широкому динамическому диапазону.

К таким приложениям относятся подсчет лейкоцитов, эритроцитов, простейших, водорослей и дрожжей. Начните этот эксперимент с разбавления только что отделенной суспензии клеток HEK 2 93 в среде, обладающей физиологической проводимостью, такой как разбавитель потока или PBS, до соответствующей концентрации. Аккуратно растирайте, чтобы свести к минимуму кластеризацию ячеек, убедитесь, что устройство отключено от источника питания.

Затем включите mxi Z При нажатии кнопки питания отобразится главный экран. В Mxi Z используются одноразовые кассеты типа M или S, которые представляют собой прецизионные микрофлюидные датчики. Каждая кассета имеет два загрузочных порта, обозначенных синим овалом и помеченных одним или двумя.

Каждая кассета может быть использована для двух испытаний. Кассеты типа М имеют рабочий диапазон от 3000 до 500 000 ячеек на миллилитр. Диапазон для кассет типа S составляет от 3000 до 2,5 миллионов ячеек на миллилитр.

Нажмите на лоток и вставьте кассету, чтобы обеспечить однородность образца, медленно перевернутую несколько раз. Затем пипетка 75 микролитров образца. Плотно поместите наконечник пипетки в порт для образца, удерживая пипетку под углом 45 градусов, а затем выдайте образец в порт одним плавным движением, убедившись, что образец был выдан.

Коснитесь экрана в обозначенном круге или в любом другом месте, кроме окна режима мелких частиц, чтобы начать подсчет. mxi Z начнет тест, и результаты подсчета клеток будут завершены через восемь секунд. С помощью кассеты типа M результаты автоматически отображаются с помощью запатентованного алгоритма подгонки кривой, который соответствует интересующей популяции отдельных клеток, а также корректирует общее количество на совпадение.

События или события, при которых несколько частиц или кластеров проходят через зону чувствительности клетки одновременно. Обратите внимание, что хотя эти события совпадения находятся за пределами области аппроксимации кривой справа, они все равно включаются в общее число. После того, как подходящее соответствие найдено, отображается гистограмма с высоким разрешением всей выборки вместе с числовыми значениями концентрации клеток, среднего диаметра и среднего объема.

Кроме того, в качестве индикатора общего здоровья культуры приводится индекс популяции мокси или значение MPI. Подсчеты в крайнем левом углу гистограммы являются нормальными и представляют собой базовый порог шума системы, скорректированный для оптимизации чувствительности системы и возможного количества обломков образца. После завершения прогона образца извлеките кассету из устройства, выберите «Готово» для сохранения и вернитесь на главный экран.

Визуальный индикатор подтверждает, что образец был выполнен. Если необходимо запустить второй образец, переверните кассету и вставьте ее в un. Опять же, после прогона в обычном режиме, результаты отображаются для подсчета подгонки кривой на масштабе от четырех до 34 микрон для кассеты типа M или от трех до 26 микрон для типа S, чтобы изменить масштаб оси X до четырех до 26 микрон, коснитесь значка масштабирования.

После этого нажмите значок изменения масштаба, чтобы изменить масштаб по оси X на следующие масштабы: от четырех до 18 микрон, от четырех до 10 микрон и обратно от четырех до 34 микрон. При необходимости вернитесь в режим подгонки по кривой. Тестовый номер для текущего анализа отображается в верхней части гистограммы в зеленом поле.

Данные будут сохранены по мере того, как тестовое число коснется значка стробирования для переключения режима стробирования, который позволяет вручную стробировать гистограмму. Таким образом, стробирование становится режимом сбора данных по умолчанию. Ворота можно изменить, сдвинув влево и вправо по синим маркерам ворот или коснувшись любого из них, а затем постепенно перемещая их с помощью появляющихся клавиш со стрелками.

Отображаемые подсчеты и информация о средних размерах рассчитываются только на основе частиц в пределах диапазона стробирования. Нажмите значок готово, чтобы сохранить результаты и вернуться на главный экран. Чтобы открыть тест сохранения, нажмите значок гистограммы на главном экране.

Значки до девяти сохраненных гистограмм будут отображаться одновременно: касание страницы вниз или страницы вверх или смахивание, отображение вверх или вниз. Чтобы просмотреть дополнительные результаты теста по мере необходимости, выберите значок интересующего вас теста. Каждая гистограмма будет открыта либо в режиме аппроксимации кривой, либо в режиме стробирования.

В зависимости от способа сохранения, типа кассеты, используемой для теста, M или S будет указан в левом верхнем углу экрана. Сохранено. Гистограммы также можно переключать между режимами стробирования и аппроксимации кривой, чтобы автоматически касаться строба нужного пика. Это задает оптимальные положения походки для выбранного пика.

Это особенно полезно в ситуациях с несколькими пиками. Чтобы указать пик интереса, нажмите значки со стрелками масштабирования и отмены масштабирования, чтобы настроить масштаб подсчета по оси Y гистограммы. Вертикальную шкалу также можно изменить, проведя пальцем по пику вверх для уменьшения или вниз для увеличения, нажмите значок «Назад», чтобы закрыть этот тест и вернуться на главный экран.

Данные могут быть переданы на Mac или PC с помощью приложения moxie chart. Чтобы сделать это, сначала нажмите значок Bluetooth на главном экране устройства Moxie Z. Устройство сообщит о своем идентификаторе Bluetooth на компьютере, откроет приложение moxie chart и нажмет на значок Bluetooth в правом верхнем углу.

Затем выберите устройство, которое соответствует идентификатору Bluetooth буквы Z, и выберите папку назначения для загруженных файлов в дополнение к Bluetooth. Еще один способ передачи данных с Mxi Z на компьютер — использовать USB-кабель и работать с ним как с обычным USB-устройством. С помощью файлов данных файлы данных с устройства Mxi Z, подключенного через USB, могут быть скопированы в любой каталог на компьютере.

Файлы могут быть открыты и проанализированы непосредственно с помощью приложения Mxi Charles или, поскольку они имеют формат CSV-файлов, их можно напрямую открыть в Microsoft Excel или других программах анализа данных для анализа клиентов, чтобы сравнить результаты подсчета в Mxi Z с полученными. Использование охлаждающей жидкости для противодействия идентичным суспензиям точно откалиброванных бусин и клеток млекопитающих подсчитывались обоими методами. Были протестированы четыре шарика разного размера диаметром от шести до 15,6 микрон, а также несколько различных клеточных линий.

Среднее значение трех-четырех подсчетов было построено на графике, как можно увидеть здесь. Полученные подсчеты были почти идентичными, что указывает на то, что Moxie Z способен получать точные подсчеты в широком диапазоне размеров, чтобы продемонстрировать диапазон концентраций, которые могут быть точно оценены с помощью Mxi Z. Те же бусины и клетки были последовательно разбавлены из исходных 500 000 клеток на миллилитр для кассеты типа M или примерно 2,5 миллиона клеток на миллилитр для типа S. Теоретические концентрации клеток были затем сопоставляются с полученными подсчетами, как показано здесь. Измеренные концентрации соответствовали теоретическим концентрациям клеток, демонстрируя точный подсчет в динамическом диапазоне каждой кассеты, от 3000 до 500 000 клеток на миллилитр для кассет типа M и от 3000 до 2,5 миллионов клеток на миллилитр для типа S ca для изучения вариабельности полученных результатов пяти отдельных подсчетов HEK 2 93 и элементов HELOC в 200 единицах. От 000 до 300 000 клеток в миллилитровом диапазоне были получены с использованием вызова к Z два, Moxi Z и гемоцитометра.

Как видно на этом графике, средний коэффициент вариации был сопоставим в Z 2 и mxi Z и значительно меньше, чем у гемоцитометра, что указывает на то, что воспроизводимость Mxi Z сопоставима с таковой при вызове к Z два и превосходит таковую у цитометра Hema. Чтобы продемонстрировать точность Mxi Z при определении размера частиц, изготовленные гранулы были измерены с использованием Mxi Z. Пять измерений для каждого размера гранул были измерены, усреднены и построены в сравнении с размером гранул, заявленным производителем. Mxi Z измерил бусины в размере, указанном производителем.

Значение R в квадрате составило 0,9989, чтобы продемонстрировать способность mxi Z оценивать культуру. Измерения индекса здоровья клеток здоровья были зарегистрированы с использованием Mxi Z для идентичных препаратов шипа мертвых клеток, HEK и hela и сравнивались с визуальными результатами исключения триана синего цвета того же образца в проценте жизнеспособности гемотомы или проточного цитометра guava PCA для целей сравнения. Измерения жизнеспособности образцов также были нанесены на график, как можно увидеть здесь.

Расчетная жизнеспособность для ячеек HGK и LAR, полученных с помощью Mxi Z, была на одном уровне с измерениями жизнеспособности, полученными с использованием метода исключения синего цвета Триана со значениями r в квадрате 0,9937 и 0,9728 соответственно. Полученные данные также сопоставимы с данными, полученными с использованием гуавы PCA с проточным цитометром с R-квадратами 0,9724 для клеток EK и 0,9585 для хела-клеток. Хотя в некоторых случаях индекс здоровья клеток может согласовываться со стандартными подходами к жизнеспособности, это совершенно новый и отличный метод оценки здоровья, который, следовательно, или не всегда идентичен старым методам.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как легко получить информацию о здоровье клеток, размере и количестве клеток при попытке выполнить эту процедуру. Важно убедиться, что плотность клеток находится в правильном диапазоне.