Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Mohan Babu; Olga Kagan; Hongbo Guo; Jack Greenblatt; Andrew Emili

doi:10.3791/4057

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Identification des complexes protéiques dans Escherichia coli En utilisant séquentielle Purification par affinité peptide en combinaison avec la spectrométrie de masse en tandem

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Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

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Identification des complexes protéiques dans Escherichia coli En utilisant séquentielle Purification par affinité peptide en combinaison avec la spectrométrie de masse en tandem

DOI:

10.3791/4057-v

•

14:58 min

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November 12, 2012

•

Mohan Babu², Olga Kagan, Hongbo Guo, Jack Greenblatt³, Andrew Emili³

¹Banting and Best Department of Medical Research, Donnelly Centre,University of Toronto, ²Deparment of Biochemistry, Research and Innovation Centre,University of Regina, ³Department of Medical Genetics and Microbiology,University of Toronto

Capítulos

00:05Título
01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
03:54Culturing and Sonication
05:26Affinity Purification
07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
11:02Resultados
14:27Conclusion

Summary

Tadução automática

La purification par affinité des protéines marquées en combinaison avec la spectrométrie de masse (APMS) est une méthode puissante pour la cartographie systématique des réseaux d'interactions protéiques et d'enquêter sur le fondement mécaniste des processus biologiques. Ici, nous décrivons un peptide optimisé séquentielle d'affinité (SPA) procédure APMS développé pour la bactérie Escherichia coli Qui peut être utilisé pour isoler et caractériser stables complexes multi-protéiques jusqu'à homogénéité à partir de près de même faible nombre de copies par cellule.

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