Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Mohan Babu; Olga Kagan; Hongbo Guo; Jack Greenblatt; Andrew Emili

doi:10.3791/4057

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Identificação de complexos de proteínas em Escherichia coli Utilizando a purificação por afinidade sequencial Peptide em combinação com espectrometria de massa tandem

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Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Identificação de complexos de proteínas em Escherichia coli Utilizando a purificação por afinidade sequencial Peptide em combinação com espectrometria de massa tandem

DOI:

10.3791/4057-v

•

14:58 min

•

November 12, 2012

•

Mohan Babu², Olga Kagan, Hongbo Guo, Jack Greenblatt³, Andrew Emili³

¹Banting and Best Department of Medical Research, Donnelly Centre,University of Toronto, ²Deparment of Biochemistry, Research and Innovation Centre,University of Regina, ³Department of Medical Genetics and Microbiology,University of Toronto

Capítulos

00:05Título
01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
03:54Culturing and Sonication
05:26Affinity Purification
07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
11:02Resultados
14:27Conclusion

Summary

Tadução automática

A purificação por afinidade das proteínas marcadas em combinação com espectrometria de massa (STDA) é um método poderoso para o mapeamento sistemático de redes de interacção de proteínas e para a investigação do mecanismo de base de processos biológicos. Aqui, descrevemos um otimizado seqüencial peptídeo afinidade (SPA) APMS procedimento desenvolvido para a bactéria Escherichia coli Que pode ser usado para isolar e caracterizar estáveis múltiplos complexos proteína-à homogeneidade a partir de perto mesmo números de cópias baixos por célula.

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