혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

이 절차의 목적은 기증자 마우스의 복부 대동맥을 동종 수용 마우스에 이식하는 것입니다. 이는 먼저 공여자 대동맥을 확보함으로써 이루어집니다. 다음으로, 이식 부위가 수용 동물에 구축됩니다.

그런 다음 수용 동물의 천연 대동맥을 절개하고 분열합니다. 마지막 단계는 두 개의 종단 간 혈관 문합을 사용하여 기증자 대동맥을 이식하는 것입니다. 궁극적으로 이 절차는 동종 균주 조합에서 이식 후 혈관 질환의 발달을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

예를 들어 이종성 심장 이식에 비해 이 방법의 장점은 혈관의 크기가 균일하기 때문에 형태 분석을 더 쉽게 수행할 수 있다는 것입니다. 또한, 혈관은 실질 조직으로 둘러싸여 있지 않으며, 이는 세포 침투 물질 및 분석을 복잡하게 만들 수 있는 기타 물질로 둘러싸여 있을 수 있습니다. 이 기술을 사용하는 것은 인간 임상 이식에서 다루기 어려운 문제를 의미하는 이식 후 혈관 질환과 관련된 메커니즘을 설명하는 데 특히 유용할 수 있습니다.

스트레스의 영향을 최소화하고 에너지 비축량을 최대화하려면 수술 전 최소 72시간 동안 동물을 사육장에 두십시오. 수술 당일에는 섭씨 35-38도로 설정된 발열 패드 위에 금속 수술 보드를 놓습니다. 그런 다음 마취 후 동물의 복부 복부의 털을 제거하십시오.

실험실 테이프를 사용하여 동물을 수술대에 독수리 자세로 펴서 장착한 다음 소독제로 동물의 면도한 부위 전체를 세 번 소독한 다음 멸균 가위를 사용하여 에탄올을 사용합니다. 그런 다음 체벽을 절개하여 복부 내장을 노출시킵니다. 그런 다음 멸균 면봉을 사용하여 따뜻한 식염수를 적신 멸균 거즈 조각으로 내장을 옆으로 밀어 복부의 큰 혈관을 노출시킵니다.

이제 매우 조심스럽게 무딘 다음 복부 대동맥을 하대정맥을 포함한 주변 조직으로부터 멀리 해부한 다음 요추 동맥을 조심스럽게 들어 올려 소작합니다. 박리를 위한 대동맥 부분은 신장 혈관 아래에 있어야 하며 대동맥이 대퇴 동맥으로 분기되는 지점 위에 있어야 합니다. 영역을 확인한 후 신장 동맥 바로 아래와 분기점 바로 위에 다른 타이어 봉합사를 봉합합니다.

다음으로, 가위를 사용하여 대동맥을 분리한 다음 혈관의 한쪽 끝을 매우 조심스럽게 잡고 헤파린 식염수를 떨어뜨려 중력에 의해 혈관을 통과하도록 합니다. 그런 다음 용기의 끝을 가능한 한 적게 다루십시오. 이식편을 제거하고 즉시 얼음 차가운 식염수 용기에 넣으십시오.

수혜 동물에게 마취와 진통제를 투여한 후, 그림과 같이 복부 복부를 면도합니다. 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 겐타마이신 안과 연고를 바르고, 적절한 소독을 위해 방금 설명한 대로 복부를 소독합니다. 이제 피부와 신체 벽을 통해 정중선을 단계적으로 절개합니다.

그런 다음 스프레더를 삽입하여 복부 절개 부위를 열린 상태로 유지하고 나사 어셈블리가 동물의 뒷쪽 끝을 향하도록 하여 클램프의 대부분을 방해하지 않도록 합니다. 다음으로 식염수를 적신 멸균 거즈를 장 위에 놓습니다. 그런 다음 손가락을 넣어 거즈를 부드럽게 제자리에 고정합니다.

멸균 면봉을 장 아래에 삽입하고 장이 거즈 위에 안착하도록 부드럽게 반사합니다. 멸균 거즈를 한 장 더 대고 식염수를 적신다. ATA와 하대정맥을 덮고 있는 지방 조직을 부드럽게 제거한 후 집게를 사용하여 하대정맥 해면체에서 대동맥을 조심스럽게 절개합니다.

이제 두 개의 클램프를 위한 공간을 제공할 수 있을 만큼 충분히 큰 영역을 비우고, 분할할 때 이식편을 봉합할 수 있는 충분한 혈관이 있도록 충분한 혈관을 확보하십시오. 검은색 봉합사는 혈관을 따라 체중을 느끼는 데 사용할 수 있습니다. 해부할 때 혈관 가지를 찾고 필요에 따라 저온 소작기로 가지를 소작합니다.

다음으로, 신장 동맥 바로 아래에 하나의 혈관 클램프를 삽입하고 분기점 바로 위에 다른 혈관 클램프를 삽입합니다. 그런 다음 대동맥을 자릅니다. 이 경우, 분기점에 더 가깝게 절단이 이루어지는데, 이는 분기 혈관이 두 클램프의 중간 근처에서 소작되어 문합을 위한 공극 부위를 만들고, 대동맥의 끝은 일반적으로 수축되어 약 5mm의 공간을 남깁니다.

지혈을 확인하십시오. 클램프가 올바르게 작동하면 절단 후 소량의 혈액만 빠져나와야 합니다. 다음으로, 대동맥의 절단된 끝을 헤파린화된 식염수로 헹구고 여분의 용액을 면봉으로 닦아냅니다.

이제 양쪽 끝에 세 개의 불연속 봉합사를 사용하여 이식편을 제자리에 고정합니다. 그런 다음 문합의 양쪽 끝에서 한쪽을 봉합하고 나머지는 7-8개의 불연속 봉합사로 채웁니다. 흐르는 봉합사를 선호하는 경우 혈관 벽이 이완된 상태로 유지되고 문합 시 협착이 발생하지 않도록 주의하십시오.

이제 대동맥의 두개골 끝에 있는 클램프를 조심스럽게 제거하고 봉합선에서 누출이 있는지 확인합니다. 다음으로, 젖은 면 어플리케이터로 문합 부위 위의 대동맥을 부드럽게 누르고 두 번째 클램프를 제거합니다.대동맥을 가볍게 눌렀다 놓아 혈관이 특허인지 확인합니다. 이식편은 즉시 관류되고 맥박이 보여야 합니다.

이제 장을 덮고 있는 거즈를 제거하고 정상적인 해부학적 방향을 유지하고 뒤틀리지 않도록 제자리로 다시 옮긴다. 파이브 제로 비트릴 봉합사를 사용하여 근육층을 봉합한 다음 파이브 제로 또는 6 제로 프롤린 봉합사로 피부를 봉합합니다. 마취를 끝내기 전에 진통제를 강화하기 위해 카프로펜으로 마우스에게 피하를 투여한 다음, 같은 뿌리당 0.5 - 0.8 밀리리터의 식염수를 마우스에게 투여한다.

마지막으로, 회복을 위해 가열된 케이지에 마우스를 넣고 동물을 주의 깊게 모니터링합니다. 수술 후 12시간 및 24시간에 부프레노르핀과 카프로펜을 각각 동물에게 피하로 투여합니다. 이 첫 번째 그림은 대동맥 이식편을 보여줍니다.

여기에서 흰색 화살표로 표시된 봉합 선에 주목하십시오. 56일 동안 수혜자의 생존을 추적한 전형적인 실험이 묘사되어 있습니다. 대조군은 C 대동맥을 이식한 FVB 수용자에 의한 야생형 C, 57, BL, six로 구성되었습니다.

실험 그룹은 FVB 투여자에 의한 C 57 BL 6로 구성되었으며, 헴 옥시게나제 1의 발현이 부족했습니다. 이 녹아웃은 24시간 이내에 이식편의 혈전증을 초래합니다. 특히 이로 인해 모든 수혜자가 사망했습니다.

이 마지막 그림은 정상 동물과 이식 수혜자에서 하대정맥, 동굴 및 복부 대동맥의 에코 측정을 보여줍니다. 이식편은 특허이며 이식되지 않은 대동맥과 모양이 유사합니다. 보시다시피 조직은 매우 섬세하고 작기 때문에 이 절차는 확실히 후천적인 기술이므로 절차를 성공적으로 일상적으로 마스터하기 전에 약간의 연습이 필요하다는 점을 명심해야 합니다.

이 기술은 제대로 수행되면 1시간 이내에 완료할 수 있습니다.