Periferik Sinir Hasarı Sonrası Fonksiyonel Kurtarma Değerlendirmesinde Koku Ensheathing Hücre Nakli

Bu prosedürün genel amacı, bir laringeal sinir yaralanması modelinde koku alma ve kılıflama hücrelerinin kullanımına dayanan bir hücresel transplantasyon modeli sunmaktır. Bu, ilk olarak tekrarlayan laringeal sinirin kesitli kesilmesi ve anastomozunun gerçekleştirilmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra koku alma mukozasından veya koku soğancıklarından elde edilen koku alma ve kılıf hücreleri nakledilir.

Daha sonra ameliyattan iki ila üç ay sonra hayvanlar laringoskopi ve elektromiyografi ile değerlendirilir. Son olarak, rekürren laringeal sinir histolojik çalışmalar için izole edilir. Sonuç olarak, laringoskopi, elektromiyografi ve histolojik ölçümler yoluyla tekrarlayan laringeal sinirin aksonal büyümesini ve ses tellerinin fonksiyonel iyileşmesini iyileştiren koku alma ve kılıflama hücrelerini gösteren sonuçlar elde edilebilir.

Bu yöntem, aksonal büyümenin ölçülmesini ve iyileşmenin işlevselliğini ölçme yeteneğini içeren periferik sinir yaralanması alanındaki temel soruları cevaplayabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bireyler, tekrarlayan lal sinir anastomozu, yazılı protokolde belirtildiği gibi koku soğancıklarının veya OB ve koku alma mukozasının veya OM'nin GFP işaretli primer kültürlerini oluşturduktan sonra mikrocerrahi beceriler gerektirdiğinden mücadele edeceklerdir. Tüm aletleri otoklavlayarak ameliyata hazırlanın.

Sıçan intraperitoneal ketamin ve klorpromazin enjeksiyonu ile uyuşturulduktan sonra, bir ayak parmağı yaparak sedasyon seviyesini doğrulayın. Çimdikleyin, cerrahi bölgeyi tıraş edin ve fareyi dorsal dekübite yerleştirin, cildi alternatif alkol ve Betadine solüsyonu ile dezenfekte edin. Bundan sonra, steril bir cerrahi ortam oluşturun ve ameliyat boyunca steril prosedürleri sürdürün.

İki santimetre medial servikal kutanöz insizyon yapmak için bir neşter kullanın. Daha sonra, medial beyaz çizgiyi takip ederek, infrahyoid kaslar arasında ortostatik bir ekartör kullanarak infrahyoid kasların dikey bir insizyonunu gerçekleştirin. Gırtlağı ve ardından tekrarlayan gırtlak sinirini veya RLN'yi açığa çıkarın.

Daha sonra cerrahi mikroskop altında, bir nokta 11 T sütür ile yedinci trakeal halka seviyesinde siniri tam olarak kesmek için mikro makas kullanın. Transplantasyondan hemen önce gırtlağı de innerve etmek için anastomoz yapın. OB ve OM hücrelerini bulaşıklardan çıkarmak için% 0.05 tripsin EDTA kullanın.

Daha sonra sindirimi durdurmak için, hücreleri beş dakika boyunca 432 G'de santrifüjledikten sonra beş mililitre ılık ortam ekleyin. Hücreleri saymak için bir hemo sitometre kullanın ve bu modeldeki hücresel konsantrasyonu 1.2 ila altı kez 10 arasında ayarlayın, 30 mikrolitre D-M-E-M-F'deki altı hücreye 12 mikro füj tüpünde kullanıldı. Hücrelerin büyüme faktörüne bir ila iki oranını hazırlayın, matrijeli azaltın ve transplantasyondan hemen önce buzun üzerine yerleştirin.

Tüpü buzdan çıkarın ve karışımı ısıtmak için tutun. Bir pipet kullanarak, hücre matrigel solüsyonunu anastomoz bölgesine boşaltın ve karışımın ayarlandığında yaralı sinir üzerinde kendi kendine bir araya gelmesine izin verin. Kasları ve cildi kapatmak için dört adet dikiş kullanın.

Fareyi ayrı bir kafese yerleştirin ve 24 saat boyunca bir ısıtma lambasının altında tutun. Anesteziden sonra ameliyattan yaklaşık iki ay sonra, önümüzdeki beş gün boyunca analjezik uygulayın. Bu videoda daha önce anlatıldığı gibi sıçanlar, sedasyonu onaylamak için bir ayak parmağı tutamağı kullanın.

30 derecelik bir video yerleştirmeden önce fareyi dorsal dekübite yerleştirin. Laringoskop, her kayıt için aynı görünümü yeniden üretmek üzere gırtlağın en iyi görünümünü sağlayacak şekilde ayarlanmıştır. Posterior komissür, OID'nin vokal apofizine girdiği sağ vokal kord ve oid'in vokal hipotezine girdiği sol fokal kord gibi anatomik yer işaretlerini belirleyin.

Ardışık maksimal abdüksiyon ve maksimal abdüksiyon olmak üzere üç dizi seçerek ses teli hareketlerini kaydedin. Laringeal fonksiyonu analiz etmek için, ses tellerinin maksimal ve maksimal abdüksiyon hareketi arasındaki farkı ölçerek mutlak açısal hareketi belirleyin. Elektromiyografi yapmak için hareket genliğini ölçerek dinamik skoru ve sinkinezi ve paradoksal hareketleri ölçerek fonksiyonel skoru belirleyin.

Tekrarlayan sinir anastomozu için gösterildiği gibi gırtlak ve trakeayı açığa çıkardıktan sonra sıçanın hamstring kasına bir elektrot yerleştirin. Rikotiroid kıkırdağını açığa çıkarın. Daha sonra, mikro makas kullanarak, arka krikotiroid veya PCA kasını ortaya çıkarmak için krikotiroid kıkırdağını açın.

Spontan havalandırma altında hayvan ile kas içine monopolar bir iğne elektrodu yerleştirin. PCA kasının elektriksel kas aktivitesini kaydetmek için bir edinim sistemi kullanın. Aşağıdaki ölçeği kullanarak sıfırdan üçe kadar kalitatif bir puan atayarak kas aktivitesini zenginlik ve solunumla senkronizasyon açısından analiz edin.

Sıfır, inspirasyon sırasında artış olmadan denenmemiş bir izlemeye eşittir. Bir, ilhamın arttığı kafiyeli bir izlemeye eşittir, ancak zayıf izleme, iki, daha zengin aktiviteye sahip kafiyeli bir izlemeye eşittir ve üç, kafiyeli bir izlemeye eşittir. Bu, maksimum kasıtlı aktiviteye benzer bir girişim modeli oluşturan çok zengindir.

Daha sonra, küçük boyutu nedeniyle RLN'ye zarar vermemek için vagus sinirini açığa çıkarın, ardından bir elektrot takın ve bu bölgede uyarın. PCA kasındaki gecikmeyi ve potansiyel süreyi kaydedin. Son olarak, mikroskop altında bir pentobarbital aşırı doz kullanarak hayvana ötenazi yaptıktan sonra, anastomozu, sütürü bulun ve anastomoz ile gırtlak arasındaki RLN'nin distal kütüğünü çıkarın.

Koku alma, mukoza ve koku soğancıklarının primer kültürlerinden hücre naklinden sonra burada gösterilen metin protokolüne göre histolojik analiz yapın, solunum sırasında PCA kasında elde edilen EMG izlerine örnektir. Kontrol grubundaki hayvanlar, Rerated grubunda bulunmayan inspirasyon sırasında bir artışla zengin bir elektriksel kas aktivitesi sergiledi. Bu şekilde, toluidin mavisi boyama ile RLN'nin histolojik analizleri, normal yeniden innerve edilmiş ve nakledilmiş hayvanlardan alınan tipik lif profillerini göstermektedir.

Bu ölçüm, burada gösterildiği gibi miyelinli liflerin sayısının, liflerin ortalama boyutunun ve miyelinin ortalama kalınlığının ölçülmesine izin verir. Histolojik analizleri tamamlamak. Siyatik sinirde sinir içi transplantasyon sonrası GFP pozitif hücrelerin takibi yapıldı.

RLN yerine bu bölge seçildi çünkü R lns'nin küçük boyutu sinir içi transplantasyonu engelliyor. Nüks perial sinirin Hans master anastomozu düzgün bir şekilde yapılırsa 15 dakikada yapılabilir. Bu teknikler, periferik sinir hasarı alanındaki araştırmacıların bir sıçan modelinde hücresel transplantasyonun kullanımını keşfetmesinin yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, tekrarlayan sinir yaralanması yaralanması modelinde hücrelerin nasıl nakledileceğini iyi anlamalı ve elektromiyografi, laboratuvar endoskopisi ve histolojik ölçümler yoluyla ses tellerinin fonksiyonel iyileşmesini değerlendirmelisiniz.