A purificação de gel é usada para recuperar fragmentos de DNA após a separação eletroforética. A recuperação de DNA de um gel de agarose inclui três passos básicos: ligação, lavagem e eluição de uma coluna de sílica. Acredita-se que o DNA se liga à sílica na presença de sal alto através de uma ponte de sal. Após a ligação, o DNA é lavado de impurezas e elucido sob condições de baixo sal interrompendo essa interação.
Este vídeo passa por um procedimento passo-a-passo generalizado para cortar uma banda do gel, solubilização de gel, purificação através da ligação a uma coluna de sílica, e elução de DNA purificado. Além disso, a apresentação discute várias dicas para garantir a purificação bem sucedida do gel, incluindo a importância de executar um gel de agarose com um marcador ou escada que tenha DNA de tamanhos conhecidos.
Procedimento
A purificação de gel é um procedimento padrão realizado para recuperar fragmentos de DNA desejados de géis agarose após separação eletroforética. Depois de dissolver o fragmento de gel e executá-lo através de um filtro especializado, este procedimento produz DNA livre de impurezas como sais, nucleotídeos livres e enzimas, adequados para aplicações a jusante. O princípio básico por trás da recuperação de DNA do gel de agarose envolve uma sequência de passos de ligaçã…