הכנת מיכה נתמכת יפידים bilayers לרזולוציה גבוהה מיקרוסקופיה אופטית הדמיה

ההליך המוצג כאן מציג שיטה קלה להכנת שומנים נתמכים ב-MICA על ידי שכבות המתאימות להדמיה ברזולוציה גבוהה, כגון מחקרי מעקב אחר מולקולה בודדת. משטח ה-MICA מוכן על ידי פיצול סנדוויץ' של יריעת MICA בודדת המודבקת בין שקופית מיקרוסקופ הזכוכית להחלקת הכיסוי באמצעות דבק אופטי שחשף משטח נציץ טרי שטוח ודק במיוחד. על ידי הרכבת תא פלסטיק קטן העשוי מכוס בקבוקון של מיליליטר וחצי, נפח שלפוחיות השומנים הנדרשות להיווצרות דו-שכבתית יכול להיות נמוך עד 30 מיקרוליטר.

כצעד ראשון, קח את הגיליון הרב-שכבתי של MICA כפי שהוא מגיע מהספק וחתוך אותו במספריים לחתיכות קטנות יותר. עלון לשניים או שלושה עלעלים דקים יותר באמצעות להב סכין טרי. כעת נקה את הכיסוי ישן ביסודיות.

זה כרוך בהצבת כיסוי של 0.17 מילימטר. ישן בצנצנת אימונים מזכוכית בכל כיסוי. לישון בחריץ נפרד ולסוניקט בחומר ניקוי למשך 30 דקות בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס.

שוטפים את הכיסוי. ישן 10 עד 20 פעמים עם מים מיני מפתח ולייבש בפן עם זרם אוויר או חנקן. קח שקופית זכוכית מיקרוסקופ ונקה אותה במקום.

טיפה קטנה של כ-15 מיקרוליטר של ahe אופטי בעל צמיגות נמוכה על פיצוץ המיקרוסקופ ועל הגלובוס בעבר. חותכים את העלון על קופסת אור UV למספר דקות. השתמש בסקוטש כדי לקלף כמה שכבות של נציץ.

השכבות הראשונות יהיו מקוטעות, אז עשו זאת עד שתראו את השכבות המחוברות לסקוטש. הקלטת אחידה ומלאה. מכסים את הקלטת.

יש להניח טיפה של דבק אופטי בעל צמיגות גבוהה על משטח מיכה. ודא שאין שם בועות אוויר. יש להניח בעדינות את השינה הנקייה על הטיפה הפוגענית.

השתמש בפינצטה כדי להקיש בעדינות על הכוס כדי לפזר את האה. שוב, רפאו דבק באור UV למשך מספר דקות. השתמש בסכין כדי לפצל את הכריך המורכב מזכוכית.

החליקו את MICA וכסו את מצב השינה. ברוב המקרים, רק שכבה דקה מאוד של MICA תישאר דבוקה לשינה הכיסוי. השתמש במיקרוסקופ חיתוך כדי לבדוק את משטח ה-MICA שלך על ידי ביצוע שריטה קטנה עם קצה מחט או פינצטה.

אתה יכול בקלות לומר אם המשטח הוא למעשה נציץ, כאשר המשטח נשרט באופן אחיד, כמו כאן או על הדבק האופטי, כמו כאן שבו המשטח זוהר. קח מבקבוקון זכוכית של מיליליטר וחצי, הסר את מיכל הגז והדביק את הפקק למשטח MICA בעזרת לק. תן לזה להתייבש כמה דקות.

עכשיו אתה יכול להכין ליפיד דו-שכבתי לתיקון שומנים שכבה אחר שכבה באמצעות פרוטוקול סטנדרטי כאן. טיפה של 30 מיקרוליטר של שלפוחיות שומנים מונחת בתא מכסה הבקבוקון ותדגור למשך 60 דקות לפני שטיפת המאגר שלך. לאחר הכביסה הדגימה מוכנה להדמיה.

במקרה זה, הוא מותקן במחזיק מדגם בהתאמה אישית. ניתן לצפות בקלות במולקולות בודדות על משטח MICA מוכן כזה. כאן אנו משווים A-D-O-P-C לפי שכבה הנתמכת על זכוכית ונציץ.

שימו לב שסוג התנועה שונה באופן מהותי בין שני המשטחים הללו. הנתיב של מולקולות בודדות בצבעים בפאנלים הימניים מראה בבירור שהתנהגות הדיפוזיה ב-MICA שונה מזו שבזכוכית. עם זאת, אין הבדל משמעותי באיכות ההדמיה.

האריגה הממוצעת של הפונקציה הישרה בחצי עוצמה מקסימלית עבור 20 כתמים כמעט זהה עבור שני המצעים, מה שמצביע על כך שמשטח ה-MICA חדיר במלואו על ידי אור מבלי להכניס סטיות אופטיות ניכרות. בסך הכל, MSDS מראה הבדל ברור בהתנהגות הדיפוזיה. עם זאת, עבור כל מקרה, ניתן להבחין בשתי אוכלוסיות של חלקיקים המתפזרים בקצב שונה.

שני מקדמי דיפוזיה שונים, מהיר ואיטי, חולצו מהזנה מעריכית כפולה להסתברות מצטברת של תזוזה ריבועית. עבור דו-שכבת DOPC זו, שני רכיבי הדיפוזיה מהירים יותר על פני השטח של MICA, החלקיקים הנעים לאט ב-MICA איטיים פי 10 עד 20 מהמהיר. אוכלוסייה איטית על זכוכית, לעומת זאת, קרובה להיות חסרת תנועה כאן.

הראינו שסוג המשטח הזה עשוי לעשות הבדל בהתנהגות הדיפוזיה של שכבות דו-שכבתיות של שומנים. לפיכך, יש להיזהר כאשר משווים תוצאות בין מחקרים על שכבות דו-שכבתיות הנתמכות על מצעים שונים כגון MICA ושכבות הדמיית זכוכית על MICA היא בדרך כלל די קשה בגלל הכנה מסובכת שהראינו עם זאת, דרך פשוטה אך יעילה להכנת משטחים באיכות כה גבוהה.