Стереотаксическая Настой олигомерных бета-амилоида в гиппокампе мыши

Общая цель этой процедуры заключается в стереотаксической инъекции Liga meric a beta 1 42 в зубчатую извилину гиппокампа. Это достигается путем предварительного приготовления мерика лиги, раствора бета 1 42. Вторым этапом является определение координат инжекции.

Далее хирургическим путем обнажают череп животного и вводят в него два отверстия для введения иглы. Последним шагом является перемещение иглы шприца в окончательное положение и введение бета 1 42. В конечном счете, метод инъекции Stereotaxic Abeta 1 42 используется для изучения токсических эффектов Abeta 1 42 на живом животном.

Основное преимущество этого метода по сравнению с существующими трансгенными мышиными моделями Abeta 42 заключается в том, что олигомерная ALA 42 может быть повышена особым и временным образом и надежно воспроизводить патологию клеточной гибели, которая отсутствует в трансгенных моделях мышей. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области болезни Альцгеймера, например, как распространяются патологические процессы при болезни Альцгеймера. Чтобы начать эту процедуру, побрейте голову мыши, находящейся под наркозом, чтобы обнажить кожу.

Далее поместите мышь на грелку в стереотаксическую рамку. Затем закрепите его резцы в зубной гарде и носовой наконечнике над мордой мыши. После этого расположите ушные планки в слуховой маусс для того, чтобы закрепить голову для проверки.

Если головка зафиксирована, осторожно нажмите на нее и убедитесь, что она не двигается. Затем нанесите мазь на оба глаза, чтобы сохранить влагу. После этого продезинфицируйте место операции, нанеся бетадин на кожу над черепом, а затем 70% этанол стерильными ватными тампонами.

Проведите чередование очистки бетадином и этанолом еще два раза. Теперь сделайте скальпелем разрез в два-три миллиметра по средней линии кожи головы. С помощью прямых тонких ножниц удлините линию разреза примерно на 1,0 сантиметра, чтобы обнажить сагиттальный шов bgma и лямбду черепа.

После этого с помощью щипцов раздвиньте кожу. Очистите череп стерильным ватным тампоном, смоченным в стерильном физрастворе. Затем используйте чистый сухой ватный тампон, чтобы высушить череп.

Далее отметьте точку. На брема расположите шприц Гамильтона с помощью микроманипулятора так, чтобы кончик иглы просто касался точки на bgma. Затем запишите координату DV, отметьте точку на точке Лямбда, убедитесь, что ось АР черепа находится на одном уровне, переместив шприц кзади к точке Лямбда.

Кончик иглы должен касаться точки Лямбда, как это касалось точки BGMA. После этого запишите положение DV. Координаты DV для Bre, MA и Lambda должны быть в пределах 0,5 миллиметра.

Теперь верните кончик иглы в точку BMA. Запишите начальное положение точки доступа. Затем вычислите конечную позицию AP, вычтя два миллиметра из начальной точки ap.

Скоординируйте и переместите иглу шприца в положение конечной координаты AP. Затем запишите текущую координату ML. Вычислите левую и правую конечные координаты ml, прибавив или вычтя 1,3 миллиметра от начального ml.

Скоординируйте и переместите иглу шприца в конечные координаты ML. Прикоснитесь кончиком иглы к поверхности черепа на обоих концах координат ML и убедитесь, что координаты DV находятся в пределах 0,5 миллиметра. При этом в конце мл координаты, потяните иглу вверх, на 0,5 на один сантиметр над черепом.

Отметьте точку на черепе темным маркером сверхтонкой точки. Повторите этот шаг для контралатеральной стороны черепа. Затем отодвиньте шприц в сторону.

Просверлите отверстие слева или справа мл. Скоординируйте на черепе с помощью сверла диаметром 0,8 мм. Повторите этот шаг для контралатеральной стороны.

После этого переместите шприц к одному из вновь введенных отверстий. Опустите иглу прямо за череп и будьте осторожны, чтобы не проколоть мозг, чтобы убедиться, что игла прошла через череп. Осторожно прижмите иглу к черепу, чтобы убедиться, что игла не выйдет из отверстия.

Затем запишите начальную координату DV. Вычислите окончание dv. Координатируйте путем вычитания 2,2 миллиметра от начальной координаты DV.Coordinate и опустите иглу до конечной точки db.

Затем Координируйте стереотаксический инжекторный насос на впрыскивание четырех микролитров бета 1 42 в зубчатую извилину со скоростью 0,5 микролитра в минуту. После инфузии дайте игле оставаться на месте еще на минуту, чтобы свести к минимуму обратный поток раствора из места инъекции. После этого переместите иглу на другую сторону мозга и повторите процедуру.

Теперь открутите ушные планки. С помощью щипцов стандартного образца Студенческого образца стяните кожу головы и заклейте рану швом. Снимите носовой щиток и снимите мышь.

Введите один миллилитр стерильного физиологического раствора мыши внутрь для увлажнения и введите бупренорфин в дозе 0,1 мг на килограмм подкожно для облегчения боли. После этого переложите мышь в чистую пустую клетку, установленную поверх горячей плиты с температурой 42 градуса Цельсия, пока она не проснется. Затем верните мышь в клетку с достаточным количеством пищи и воды.

На этом рисунке показана инфузия бета-142 и носителя в левую и правую зубчатые извилины соответственно девятимесячной мыши. Прерывистыми линиями обозначена вытянутая инъекция, а стрелками — свернувшаяся зубчатая извилина. В течение одной недели после введения Abeta 1 42 зубчатая извилина демонстрировала повышенные уровни Abeta 1 42 в молекулярном слое и полиморфном клеточном слое вблизи места инъекции через 7 и 14 дней.

Abeta 1 42 вызывал увеличение туннельного положительного окрашивания и уменьшение толщины зубчатой извилины, подтверждая нейродегенеративные эффекты Abeta 1 42. Здесь ретроградный индикатор флюорозолота был введен совместно с Abeta 1 42 в зубчатую извилину. Через семь дней после инъекции флюозолд был обнаружен в базальном отделе переднего мозга, что свидетельствует о ретроградном транспорте метки через холинергические нейроны.

Для количественной оценки были выбраны флюозолдин-положительные нейроны в базальном отделе переднего мозга. Через семь дней после инъекции Абета 1 42 вызвал увеличение туннеля и уменьшение чата. Положительные нейроны в четырех базальных зонах мозга После освоения этой техники можно выполнить примерно за 30 минут при правильном выполнении.

После этой процедуры можно использовать другие методы для ответа на дополнительные вопросы, такие как исследования молекулярного механизма для изучения механистического эффекта инфузии амилоида на мозг. Я хотел бы поблагодарить вас за просмотр нашего видео и надеюсь, что метод будет полезен в ваших экспериментах.