Orthotopische Hind Gliedmaßen Transplantation in der Maus

Das übergeordnete Ziel dieses Lehrvideos ist es, ein Mausmodell der orthotopen Transplantation der Hintergliedmaßen unter Verwendung einer nicht nahtfähigen Manschettentechnik für supermikrovaskuläre Anastomose vorzustellen. Tiermodelle sind für das Verständnis und die Behandlung menschlicher Krankheiten von größter Bedeutung und haben in den letzten zwei Jahrzehnten den Weg dafür geebnet, dass die rekonstruktive Transplantation zur klinischen Realität wurde. Dieses spezielle Modell kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im Zusammenhang mit dem physiologischen Weg einer alloimmunen Reaktion zu beantworten, die spezifisch für vaskularisierte Komposit-Allotransplantate ist.

Der Hauptvorteil der Technik besteht darin, dass die Technik ohne Nahtmanschette die Komplexität erheblich reduziert und die Erfolgsrate dieses supermikrovasulären Verfahrens erhöht. Nachdem Sie den geeigneten Sedierungsgrad durch Zehenkneifen bestätigt haben, rasieren Sie die hintere Gliedmaße und die Leiste des Spendertieres. Desinfizieren Sie anschließend die Haut mit 10%Povidon-Jod und legen Sie die Maus unter ein Präpariermikroskop.

Beginnen Sie mit einer Schere die Entnahme der Spendergliedmaßen mit einem Hautschnitt in der Leistengegend proximal des mittleren Oberschenkelbereichs. Umständlich wird der Schnitt verbunden, um die hintere Gliedmaße vom Rest des Körpers abzugrenzen. Identifizieren und präparieren Sie die Oberschenkelarterie, die Vene und den Nerv.

Verwenden Sie dann eine Pinzette und eine Mikroschere, um die drei Strukturen zu trennen. Die Vorbeugung von Mikrotraumata an der Gefäßwand durch die Anwendung einer No-Touch-Technik ist für den Erfolg des Eingriffs unerlässlich. Nachdem der Gefäßstiel präpariert wurde, teilen Sie mit der Mikroschere die Gefäße am Leistenband.

Setzen Sie die Teilung der einzelnen ventralen und dorsalen Muskelgruppen etwa in der Mitte des Oberschenkels fort, um das Transplantat vom Spendertier zu trennen. Dann wird der Femurschnitt in der Mitte des Femurschafts durchtrennt. Spülen Sie das entnommene Glied mit einer Spritze mit einer 33-Gauge-Nadel mit zwei ml heparinisierter Kochsalzlösung von vier Grad Celsius aus.

Legen Sie dann einzelne Polyimidmanschetten auf die Oberschenkelvene und die Arterie. Und lagern Sie das Transplantat in nasser Baumwollgaze in einer Petrischale bei vier Grad Celsius, bis es eingesetzt wird. Die Montage der Pesis auf den Polyimidmanschetten ist der kritischste Schritt des Eingriffs.

Da Fehlbildungen die Durchblutung beeinträchtigen und unsachgemäßer Druck einige Antibiotikagewebe freilegen kann, erhöht sich die Wahrscheinlichkeit einer Thrombosebildung. Um die Hintergliedmaße des Empfängers zu entfernen, injizieren Sie 0,3 ml warme Kochsalzlösung intraperitoneal. Machen Sie einen umlaufenden Schnitt um die hintere Extremität und identifizieren und präparieren Sie die Oberschenkelarterie, die Vene und den Nerv, wie gerade gezeigt.

Nach dem Präparieren des Gefäßstiels klemmen Sie die Oberschenkelgefäße am Leistenband ein. Und schneiden Sie die Gefäße distal an der oberflächlichen Oberbaucharterie. Fahren Sie fort, die einzelnen ventralen und dorsalen Muskelgruppen etwa in der Mitte des Oberschenkels zu teilen, um die ursprüngliche Hintergliedmaße vom Empfängertier zu trennen.

Dann wird der Oberschenkelknochen in der Mitte des Oberschenkelschafts durchtrennt. Verwenden Sie dann eine 20-Gauge-Spinalnadel als Markstab und richten Sie die Femurknochen des Empfängers und das Transplantat in der ursprünglichen Position der hinteren Gliedmaßen aus. Verbinden Sie die Oberschenkelknochen des Spenders und des Empfängers.

Verwenden Sie resorbierbares Nahtmaterial, um die ventralen und dorsalen Muskelgruppen zu verbinden. Die genaue und schnelle Durchführung dieser Ausrichtung verhindert einen längeren Blutverlust aus der Knochenhöhle. Um die Oberschenkelgefäße zu verbinden, ziehen Sie die Empfängerseite des Gefäßes über die Polyimidmanschetten.

Und verwenden Sie eine 10-0 Nylonnaht, um das Empfängergefäß mit einem umlaufenden Band an der Manschette zu befestigen. Wenn das Gefäß stabilisiert ist, lösen Sie die Klammern. Und überprüfen Sie visuell, dass die Manschetten nicht falsch gedreht sind.

Überprüfen Sie visuell die Homöostase und verwenden Sie Elektrokauter, um jede Blutungsquelle zu stoppen. Verschließen Sie dann die Haut mit nicht resorbierbaren Nylonnähten. Und überwachen Sie das Tier, bis es sich vollständig erholt hat.

Die Durchführung einer vaskularisierten Komposit-Allotransplantation in einem Mausmodell unter Verwendung dieser nicht nahten Manschettentechnik ermöglicht das Erreichen eines hervorragenden und langfristigen Überlebens von Transplantaten und Tieren. Darüber hinaus stellt diese Technik eine zuverlässige Methode dar, um reproduzierbare Ergebnisse der allmählichen Abstoßung von Allotransplantaten und ein vaskularisiertes Komposit-Allotransplantationsmodell zu erzielen, wie durch die Bilder dokumentiert. In der Tat unterstreicht die histologische Analyse von Geweben von Tieren, die einer Abstoßung unterzogen wurden, die reproduzierbare Dynamik der Abstoßung von Allotransplantaten in diesem Mausmodell.

Einmal gemeistert, kann diese Technik in 90 bis 120 Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Bei diesem Eingriff ist es wichtig, daran zu denken, dem Umgang mit dem Gewebe größte Aufmerksamkeit zu schenken und jede Art von Blutung zu vermeiden. Nach ihrer Entwicklung kann diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der rekonstruktiven Transplantation ebnen.

Untersuchung grundlegender mechanistischer Fragen im Zusammenhang mit der Alloimmunität von vaskularisierten Komposit-Allotransplantaten. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie alle kritischen Schritte einer orthotopen Transplantation der Hintergliedmaßen in der Maus durchführen können.