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siRNA Transfection and EMSA Analyses on Freshly Isolated Human Villous Cytotrophoblasts

As análises siRNA transfecção e EMSA sobre recentemente isolados das vilosidades citotrofoblastos Humanos

DOI:
10.3791/53995-v

•

09:57 min

•

September 20, 2016

•

, , ,
1Department of Biological Sciences,University of Quebec in Montreal, 2Department of Pharmacology and Therapeutics,McGill University, 3Department of Clinical Sciences,University of Montreal

Capítulos

  • 00:05Título
  • 01:00Evaluation of the Purity of Isolated Primary Villous Cytotrophoblasts
  • 03:13siRNA Transfection of Human Primary Villous Cytotrophoblasts
  • 04:55Preparation of Nuclear Extracts from Cultured Cells
  • 05:52Radiolabeling of Single Stranded Oligonucleotide
  • 06:50DNA Binding Reaction
  • 08:07Results: Syncytin-2 Knowckdown and Visualization of Syncytin-2 DNA-protein Complexes
  • 09:14Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Este protocolo descreve um método para eficazmente transfectar siARN em citotrofoblastos vilosidades humanos isolados de fresco utilizando formação de microporos e identificação de complexos de ADN-proteína nestas células. As células transfectadas pode ser monitorado por análises Western blot e EMSA durante o tempo de cultura de 4 dias.

Tags

SiRNA TransfectionEMSAHuman Villous CytotrophoblastsPlacenta ResearchGene ExpressionCytotrophoblast DifferentiationRegulatory MechanismsFACS AnalysisCK7 Positive CellsFlow Cytometry

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