É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Título
- 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
- 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
- 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
- 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
- 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
- 10:16Conclusion
Vi præsenterer en protokol for den funktionelle vurdering af omfattende single-site mætning mutagenese biblioteker af proteiner udnytte high-throughput sekventering. Vigtigere er det, denne fremgangsmåde bruger ortogonale primerpar at multiplekse bibliotekskonstruktion og sekventering. Repræsentative resultater ved hjælp af TEM-1 β-lactamase valgt på en klinisk relevant dosering af ampicillin leveres.
